交聯葡聚糖凝膠

交聯葡聚糖凝膠

SephadexG交聯葡聚糖的商品名為Sephadex,不同規格型號的葡聚糖用英文字母G表示,G後面的阿拉伯數為凝膠得水值的10倍。例如,G-25為每克凝膠膨脹時吸水2.5克,同樣G-200為每克乾膠吸水20克。交聯葡聚糖凝膠的種類有G-10、G-15、G-25、G-50、G-75、G-100、G-150、和G-200。因此,“G”反映,凝膠的交聯程度,膨脹程度及分布範圍。

基本介紹

  • 中文名:交聯葡聚糖凝膠
  • 外文名:Sephadex
  • 適用於:脫鹽、肽與其它小分子的分離
  • 溶於:水及親脂溶劑
  • 使用方法: 乙醇浸泡
簡介,商品屬性,用途,製備過程,使用方法,

簡介

商品屬性

Sephadex LH-20,是─Sephadex G-25的羧丙基衍生物, 能溶於水及親脂溶劑,用於分離不溶於水的物質。
交聯葡聚糖凝膠是 將純化後的線性葡聚糖(a-1,b-吡喃型葡聚糖)與環氧氯丙烷反應,再導入丙三醇側鏈而在葡聚糖鏈間形成交聯鏈,再將所得的凝膠製成直徑不同的球形即可。所得三維實體在水中能溶脹而不能溶解。交聯度越高,凝膠孔徑越小。

用途

Sephadex G-10葡聚糖凝膠 G-10 分離範圍<700 適用於脫鹽、肽與其它小分子的分離
PX G-10柱按照中華人民共和國藥典規定了採用色譜法測定頭孢他啶、頭孢哌酮、頭孢噻肟和頭孢曲松四種藥物中高分子雜質的含量。我公司(天津譜祥科技)改進了此色譜柱的填法從簡易乾填法到現潤濕填法柱效從幾百提高到1600(葡聚糖2000)。適合檢測:頭孢唑肟鈉、美洛西林鈉、鹽酸頭孢吡肟、青黴素、阿莫西林、頭孢曲松鈉、頭孢拉定、頭孢他啶鈉、哌拉西林鈉他唑巴坦鈉、頭孢尼西鈉、磺苄西林鈉、頭孢地尼、頭孢美唑等抗生素聚合物分析
Sephadex G-15葡聚糖凝膠 G-15 分離範圍<1500 適用於脫鹽、肽與其它小分子的分離
Sephadex G-25葡聚糖凝膠 G-25 分離範圍 1000-5000 適用於脫鹽、肽與其它小分子的分離
SephadexG-50葡聚糖凝膠 G-50 分離範圍 1500-30000 適用於多肽分離、脫鹽、清洗生物提取液、分子量測定
Sephadex G-75葡聚糖凝膠 G-75 分離範圍 3000-80000 適用於蛋白分離純化、分子量測定、平衡常數測定
Sephadex G-100葡聚糖凝膠 G-100 分離範圍 4000-150000 適用於蛋白分離純化、分子量測定、平衡常數測定
Sephadex G-150葡聚糖凝膠 G-150 分離範圍 5000-300000 適用於蛋白分離純化、分子量測定、平衡常數測定
Sephadex G-200葡聚糖凝膠 G-200 分離範圍 5000-600000 適用於蛋白分離純化、分子量測定、平衡常數測定

製備過程

葡聚糖凝膠微珠表面形態存在粒子凝集和表面粗糙兩種不良情況。粒子凝集的原因是分散劑聚醋酸乙烯酯(PVAc)在鹼性條件下水解導致親水性增強,以及交聯反應的中間產物具有絮凝作用。另外,交聯後粒子粘度增大也可導致凝集。葡聚糖微珠表面粗糙是由於後處理時PVAc的微小附著物沒有從微珠表面完全除去而造成的。作者採取低溫分散、交聯,分步加入交聯劑和調節攪拌速度等控制手段,有效地解決了上述問題。

使用方法

1. 乙醇浸泡:
在室溫下,將乾粉浸泡於50-60%乙醇中至少24小時,並不斷攪拌以保證凝膠溶脹,用無鹽水洗去殘存的乙醇濾乾;
2.無鹽水浸泡:
室溫下,在無鹽水中充分溶脹24小時,間隙攪拌,以保證凝膠的完全溶脹,然後;
3. 鹽酸浸泡:
常溫下再用0.2N HCl浸泡12小時,間隙攪拌,濾乾,水洗至中性;
4. 將溶脹好的凝膠脫氣後(真空抽濾或超音波)根據裝柱要求一次性置入柱內,注意保持濕態裝柱,並避免柱內產生氣泡或斷層;
5. 上樣前平衡層析柱至少3-5 個柱體積直到記錄儀基線變得平穩為止(流出液的PH值等於上柱的Buffer 的PH值);
6. 凝膠過濾的上樣量一般為5%的柱床體積,我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積,視分離情況可以調整;脫鹽時上樣量可以達到20% 的柱床體積,柱高的選擇也與分離要求相關,柱高控制在40-50cm 以下,過高的凝膠層會引起較大的反壓,應當儘可能避免。難分離物質要有一定柱高和流速控制,脫鹽時高徑比為5:1 即可;
7. 洗脫方法:
可以用無鹽水,也可以採用上柱時的緩衝液洗脫;在上柱Buffer 中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以完全分離純化
8. 在位清洗(CIP)
凝膠使用十次後作一次CIP,目的是去除柱床內沉澱的及頑固殘留的蛋白。方法是以40cm/h 用1M 氫氧化鈉反向洗四個柱體積,再以至少三個柱體積平衡緩衝液再生。
交聯葡聚糖凝膠

相關詞條

熱門詞條

聯絡我們