酵母核酸是從天然酵母中提取的核糖核酸，目前主要套用於醫藥、保健食品以及嬰幼兒食品中，隨著現代生物提取技術的發展，酵母核酸套用趨於廣泛，尤其在抗癌新藥、保健品及嬰幼兒食品等方面取得了不少突破。酵母核酸產業的發展將成為生物產業的一個亮點。
基本介紹
- 中文名：酵母核酸
- 別名：酵母RNA
- 特點：遺傳物質
- 用途：抗癌新藥等
- 目的：加深對核酸性質的認識
介紹,提取,目的,原理,實驗材料,操作步驟,
介紹
酵母核酸又稱為酵母RNA，是從天然酵母中提取的核糖核酸。酵母由於種屬不同，自身所含的核酸（槳槳RNA）由3——15%不等，核酸是重要的遺傳物質，對生命體的意義非常重大（可以參照百科核糖核酸的介紹），因此近年來，國內外一些酵母生產的大公司，都先後依靠自身的酵母資源對酵母進行深加工綜合利用，生產酵母核酸產品。
酵母核酸是通過現代生物提取技術，將酵母中的核酸分離純化，使核酸的純度達到85%以上的產品，其目前主要套用於醫藥、保健食品以及嬰幼兒食記員淋品中。市面上銷售的酵母核酸分為粉體和膏體兩種形態，含量從85——95%不等，含量越高價格越貴。在國外酵母核酸的生產主要集中在巴西，我國每年進口巴西的酵母核酸大概在800噸左右，價值2—3億，酵母核酸產品屬於潛力產品，套用面不斷擴大，市場處於供不應求的局面，因此在國內一些與酵母相關的公司也紛紛開始生產，但由於原料的不同產品質量層次不同。一些啤酒生產廠家利用生產故虹習啤酒的所剩的啤酒廢酵母提取酵母核酸，因為原料質量差，產品質量很不穩定，一般酵母核酸的含量只有50%左右，而且相對轉換率低，對後續生產加工影響大，因此國內的醫藥廠家只能高價購買國外的酵母RNA產品，隨著自身技術的進步。
酵母核酸套用趨於廣泛，尤其在抗癌新藥方面，作為前體合成物質；在嬰幼兒食品中，酵母核酸經過降解後的核苷酸，對嬰幼兒的生長發育尤為重要；在保健品中可以提高免疫、抗疲勞。酵母核酸產業的發展將是生物產業的另一個亮點。
提取
目的
學習和掌握從酵母中提制RNA 的原理和方法，從而加深對核酸性質的認識。
原理
提取和製備RNA 的首要問題是選RNA 含量高的材料。微生物是工業上大量生產核酸的原料，其中RNA 的提制以酵母最為理想，因為酵母核酸中主要是RNA（2.67～10.0%），DNA 很少（0.03～0.516%），而且菌體容易收集，RNA 也易於分離。此外，抽提後的菌體蛋白質（占乾菌體的50%）仍具有很高的套用蒸雄芝價值。
RNA 提制過程首先要使RNA 從細胞中釋放，並使它和蛋白質分離，然後將菌體除去。再根據核酸在等電點時溶解度最小的性質，將pH 調至2.0～2.5，使RNA 沉澱，進行離心收集。然後運用RNA 不溶於有機溶劑乙醇的特性，以乙醇洗滌RNA 沉澱。提取RNA 的方法頌犁贈很多，在工業生產上常用的是稀鹼法和濃鹽法。稀鹼法利用細胞壁在稀鹼酷諒影汽條件下溶解，懂抹厚付使RNA 釋放出來，這種方法提取時間短，但RNA 在稀鹼條件下不穩定，容易被鹼分解；濃鹽法是在加熱的條件下，利用高濃度的鹽改變細胞膜的透性，使RNA 釋放出來，此法易掌握，產品顏色較好。使用濃鹽法提出RNA 時應注意掌握溫度，避免在20～70℃之間停留時間過長，因為這是磷酸二酯酶和磷酸單酯酶作用的溫度範圍，會使RNA 因降解而降低提取率。在90～100℃條件下加熱可使蛋白質變性，破壞磷酸二酯酶和磷酸單酯酶，有利於RNA 的提取。
實驗材料
1．實驗材料
活性乾酵母；pH0.5～5.0 的精密試紙；冰塊。
2．儀器
（1）藥物天平
（2）三角瓶（100mL）
（3）量筒（50mL）
（4）水浴鍋
（5）電爐
（6）試管木夾
（7）離心管
（8）離心機（4 000r/min）
（9）燒杯（250mL, 50mL, 10mL）
（10）滴管及玻棒
（11）吸濾瓶（500mL）
（12）布氏漏斗（60mm）
（13）表面皿（8cm）
（14）烘箱
（15）乾燥器
（16）紫外可見分光光度計
3．試劑
（1）NaCl（化學純）
（2）6mol/L HCl
（3）95%乙醇（化學純）
操作步驟
1．提取
活性乾酵母粉5g，倒入100mL 三角瓶中，加NaCl 5g，水50mL，攪拌均勻，置於沸水浴中提取1h。
2．分離
將上述提取液取出，立即用自來水冷卻，裝入大離心管內，以3 500r/min 離心10min，使提取液與菌體殘渣等分離。
3．沉澱RNA
將離心得到的上清液傾於50mL 燒杯中，並置於放有冰塊的250mL 燒杯中冷卻，待冷至10℃以下時，用6mol/L HCl 小心地調節pH 至2.0～2.5。隨著pH 下降，溶液中白色沉澱逐漸增加，到等電點時沉澱量最多（注意嚴格控制pH）。調好後繼續於冰水中靜置10min，使沉澱充分，顆粒變大。
4．抽濾和洗滌
上述懸浮液以3 000r/min 離心10min，得到RNA 沉澱。將沉澱物放在10mL 小燒杯內，用95%的乙醇5～10mL 充分攪拌洗滌，然後在鋪有已稱重濾紙的布氏漏斗上用真空泵抽氣過濾，再用95%乙醇5～10mL 淋洗3 次。由於RNA 不溶於乙醇，洗滌不僅可脫水，使沉澱物疏鬆，便於過濾、乾燥，而且可除去可溶性的脂類及色素等雜質，提高了製品的純度。
5．乾燥
從布氏漏斗上取下有沉澱物的濾紙，放在8cm 表面皿上，置於80℃烘箱內乾燥。將乾燥後的RNA 製品稱重。
6．含量測定
稱取一定量乾燥後的RNA 產品配製成濃度為10～50μg/mL 的溶液，在751 型分光光度計上測定其260nm 處的光密度值，按下式計算RNA 含量：
酵母核酸提取式中：OD260nm 為260nm 處的光密度值；L 為比色杯的光徑（cm）；0.024 為1mL 溶液含有1μg RNA 的光密度值。
結果計算
根據含量測定的結果按下式計算提取率：
酵母核酸提取實驗材料
1．實驗材料
活性乾酵母；pH0.5～5.0 的精密試紙；冰塊。
2．儀器
（1）藥物天平
（2）三角瓶（100mL）
（3）量筒（50mL）
（4）水浴鍋
（5）電爐
（6）試管木夾
（7）離心管
（8）離心機（4 000r/min）
（9）燒杯（250mL, 50mL, 10mL）
（10）滴管及玻棒
（11）吸濾瓶（500mL）
（12）布氏漏斗（60mm）
（13）表面皿（8cm）
（14）烘箱
（15）乾燥器
（16）紫外可見分光光度計
3．試劑
（1）NaCl（化學純）
（2）6mol/L HCl
（3）95%乙醇（化學純）
操作步驟
1．提取
活性乾酵母粉5g，倒入100mL 三角瓶中，加NaCl 5g，水50mL，攪拌均勻，置於沸水浴中提取1h。
2．分離
將上述提取液取出，立即用自來水冷卻，裝入大離心管內，以3 500r/min 離心10min，使提取液與菌體殘渣等分離。
3．沉澱RNA
將離心得到的上清液傾於50mL 燒杯中，並置於放有冰塊的250mL 燒杯中冷卻，待冷至10℃以下時，用6mol/L HCl 小心地調節pH 至2.0～2.5。隨著pH 下降，溶液中白色沉澱逐漸增加，到等電點時沉澱量最多（注意嚴格控制pH）。調好後繼續於冰水中靜置10min，使沉澱充分，顆粒變大。
4．抽濾和洗滌
上述懸浮液以3 000r/min 離心10min，得到RNA 沉澱。將沉澱物放在10mL 小燒杯內，用95%的乙醇5～10mL 充分攪拌洗滌，然後在鋪有已稱重濾紙的布氏漏斗上用真空泵抽氣過濾，再用95%乙醇5～10mL 淋洗3 次。由於RNA 不溶於乙醇，洗滌不僅可脫水，使沉澱物疏鬆，便於過濾、乾燥，而且可除去可溶性的脂類及色素等雜質，提高了製品的純度。
5．乾燥
從布氏漏斗上取下有沉澱物的濾紙，放在8cm 表面皿上，置於80℃烘箱內乾燥。將乾燥後的RNA 製品稱重。
6．含量測定
稱取一定量乾燥後的RNA 產品配製成濃度為10～50μg/mL 的溶液，在751 型分光光度計上測定其260nm 處的光密度值，按下式計算RNA 含量：
酵母核酸提取式中：OD260nm 為260nm 處的光密度值；L 為比色杯的光徑（cm）；0.024 為1mL 溶液含有1μg RNA 的光密度值。
結果計算
根據含量測定的結果按下式計算提取率：
酵母核酸提取