綠色螢光蛋白(GFP(綠色螢光蛋白))

綠色螢光蛋白(綠色螢光蛋白)

GFP(綠色螢光蛋白)一般指本詞條

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綠色螢光蛋白(Green fluorescent protein,簡稱GFP),是一個由約238個胺基酸組成的蛋白質,從藍光到紫外線都能使其激發,發出綠色螢光。雖然許多其他海洋生物也有類似的綠色螢光蛋白,但傳統上,綠色螢光蛋白(GFP)指首先從維多利亞多管發光水母中分離的蛋白質。這種蛋白質最早是由下村修等人在1962年在維多利亞多管發光水母中發現。這個發光的過程中還需要冷光蛋白質水母素的幫助,且這個冷光蛋白質與鈣離子可產生互動作用。

2008年10月8日,日本科學家下村修、美國科學家馬丁·查爾菲錢永健因為發現和改造綠色螢光蛋白而獲得了當年的諾貝爾化學獎

基本介紹

  • 中文名:綠色螢光蛋白
  • 外文名:Green fluorescent protein
  • 領域:生物學,光學
簡介,發展歷史,結構,套用,螢光顯微鏡,參見,

簡介

綠色螢光蛋白(Green fluorescent protein,簡稱GFP),是一個由約238個胺基酸組成的蛋白質,從藍光到紫外線都能使其激發,發出綠色螢光。雖然許多其他海洋生物也有類似的綠色螢光蛋白,但傳統上,綠色螢光蛋白(GFP)指首先從維多利亞多管發光水母中分離的蛋白質。這種蛋白質最早是由下村脩等人在1962年在維多利亞多管發光水母中發現。這個發光的過程中還需要冷光蛋白質水母素的幫助,且這個冷光蛋白質與鈣離子可產生互動作用。
在維多利亞多管發光水母中發現的野生型綠色螢光蛋白,395nm和475nm分別是最大和次大的激發波長,它的發射波長的峰點是在509nm,在可見光譜中處於綠光偏藍的位置。綠色螢光蛋白的螢光量子產率(QY)為0.79。而從海腎(sea pansy)所得的綠色螢光蛋白,僅在498nm有一個較高的激發峰點。
細胞生物學分子生物學中,綠色螢光蛋白(GFP)基因常用做報告基因(reporter gene)。綠色螢光蛋白基因也可以克隆脊椎動物(例如:兔子)上進行表現,並拿來映證某種假設的實驗方法。通過基因工程技術,綠色螢光蛋白(GFP)基因能轉進不同物種的基因組,在後代中持續表達。現在,綠色螢光蛋白(GFP)基因已被導入並表達在許多物種,包括細菌酵母和其他真菌,魚(例如斑馬魚),植物,蒼蠅,甚至人等哺乳動物的細胞。

發展歷史

1962年,已經有文獻報導科學家從多管水母屬的發光型水螅水母(luminous hydromedusan Aequorea)中提取到了具有生物發光性質的蛋白質。到了上世紀70年代,對生物發光的現象才有了一些新的進展。有科學家研究了多管水母屬生物發光系統的分子內能量轉移。到了九十年代初,科學家才克隆到GFP的cDNA,並且研究了其表達的胺基酸序列,發現 gfp 10 cDNA 編碼238個胺基酸肽段。研究A. victoria GFP 基因克隆,發現GFP基因上面有三個限制性酶切位點。這對後續科學家了解其結構有很大的幫助。
1994年2月,M. Chalfie 等人創造性的將GFP分別在Escherichia coliCaenorhabditis elegans細胞中表達,並得出結論由於GFP發光並不需要其他底物或者共同作用因子,所以GFP的表達可以用來在活體中監測基因表達和蛋白質的定位。從那以後的一段時間內,有無數的研究者投入到GFP相關的研究。就在 M. Chalfie 的報導過去一個月左右,Tsuji 等人就在E. coli中融合表達了GFP 蛋白,並且 GFP 在生物體中的激發光譜和發射光譜與自然條件下沒有明顯區別。由於 GFP 在生物體中的螢光強度不夠強,因此很難套用到實際的科學研究中。1995年,Tsien 等人提升了 GFP 發光強度,極大的推動了 GFP 在生物學研究的套用。緊接著在1996年8月 F. Yang 等人就解析出了GFP的分子結構,GFP蛋白是圓桶狀,由11個β-摺疊形成外周,裡面有一個α-螺旋,圓桶的兩端是一些不規則捲曲。同年9月,Tsien 等人就解析出了GFP的晶體結構,並闡明其發光原理。還有一些科學家通過製造突變體來篩選更優的GFP,比如:對pH敏感的GFP、專門套用於植物細胞研究的GFP,等等。除了最佳化GFP之外,很多科學家開拓思維,將GFP蛋白的套用推廣到很多研究領域,2002年,David A. Zacharias 等人就將GFP蛋白套用到膜蛋白的研究。同年,GFP蛋白甚至被做成了Zn生物探測器。

結構

野生型綠色螢光蛋白,最開始是 238 個胺基酸的肽鏈,約 25KDa。然後按一定規則,11 條β-摺疊在外周圍成圓柱狀的柵欄;圓柱中,α-螺旋發色團固定在幾乎正中心處。發色圖被圍在中心,能避免偶極化的水分子、順磁化的氧分子或者順反異構作用與發色團,致使螢光猝滅。
螢光是螢光蛋白最特別的特點,而其中的發色團起著主要的作用。在 α-螺旋上的 65、66、67位胺基酸——絲氨酸酪氨酸甘氨酸經過環化、脫氫等作用後形成發色團。有意思的是,發色團形成過程是由外周柵欄上的殘基催化,底物只需要氧氣。這暗示綠色螢光蛋白被廣泛用於不同物種的潛力:在不同物種中能獨立表達成有功能的蛋白,而不需要額外的因子。不過,現在依然在討論準確的過程。
發色團上的共軛 π鍵能吸收激發光能量,在很短的時間後,以波長更長的發射光釋放能量,形成螢光。

套用

由於螢光蛋白能穩定在後代遺傳,並且能根據啟動子特異性地表達,在需要定量或其他實驗中慢慢取代了傳統的化學染料。更多地,螢光蛋白被改造成了不同的新工具,既提供了解決問題的新思路,也可能帶來更多有價值的新問題。

螢光顯微鏡

主條目:螢光顯微鏡
GFP和它的衍生物的可用性已經徹底重新定義螢光顯微鏡,以及它被用來在細胞生物學和其他生物學科的方式。其中,最令人興奮的就是用於超分辨顯微鏡成像。

參見

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