標籤抗體，能夠高度特異性識別通過重組技術構建的融合蛋白上特殊表位的抗體。
基本介紹
- 中文名：標籤抗體
- 簡介：標籤抗體
- 主要類別：His,Flag,Myc,HA,GST,V5,GFP等
技術簡介,主要類別,
技術簡介
主要類別
Flag抗體-抗Flag標籤抗體
融合標籤，如Flag、GST等標籤的使用可以簡化蛋白質的純化過程、控制蛋白質固定的空間取向及方便檢測、使體內生物事件可視化、提高重組蛋白質的產量、增強重組蛋白質的可溶性和穩定性等。常用的標籤包括myc、HA、Flag、His、GST等。其中Flag標籤系統利用一個短的親水性八胺基酸肽（DYKDDDDK）融合到目標蛋白。
Flag標籤可位於蛋白質的C端或N端，該系統已廣泛套用於各種細胞類型，包括細菌、酵母和哺乳動物細胞等，相應的Flag標籤抗體也被廣泛套用。由於Flag標籤系統的純化條件是非變性的，因此可以純化所有有活性的融合蛋白。Flag標籤可以通過加入腸激酶處理去除，腸激酶專一識別該肽序列C末端的5個胺基酸殘基。
Flag抗體可以用於檢測和Flag標籤融合表達蛋白的表達、細胞內定位，以及純化、定性或定量檢測Flag融合表達蛋白等。
His抗體-抗His標籤抗體
融合標籤根據其相對分子質量大小可以分為兩大類：大的蛋白質分子和小的多肽片段。融合標籤的使用可以簡化蛋白質的純化過程、控制蛋白質固定的空間取向及方便檢測、使體內生物事件可視化、提高重組蛋白質的產量、增強重組蛋白質的可溶性和穩定性等。
His標籤是由6個組氨酸(His-His-His-His-His-His)組成的短肽,專門設計用於重組蛋白質的吸附純化。由於分子量較小，並且較容易分離和純化，His融合標籤與其他標籤相比有很多明顯優勢，是目前用於純化的融合標籤中使用最為廣泛的一種。利用 His標籤可以建立一個基於融合蛋白的高效檢測和純化系統。
His抗體可以用於檢測和His標籤融合表達蛋白的表達、細胞內定位，以及純化、定性或定量檢測His融合表達蛋白等。
GST抗體-抗GST標籤抗體
隨著越來越多的新基因的發現，基因融合蛋白表達體系以其在新發現蛋白研究中的顯著優勢已得到廣泛套用。其中GST標籤體系具有蛋白表達產率高、表達產物純化方便，以及利於GST抗體製備等特點。GST融合蛋白在水溶液中可溶，可從細菌裂解液中提取，在不變性的條件下通過親和層析得到。GST融合蛋白可被位點特異性蛋白酶裂解，從而除去GST蛋白。融合蛋白又是一個非常好的強免疫原，因此，很容易製備抗新蛋白的抗體。正是由於以上的優點，商品化的GST融合蛋白表達體系以及GST標籤抗體系統至今仍被廣泛套用。
GFP抗體-抗GFP標籤抗體
GFP或其突變體EGFP等被廣泛用於基因表達效率的檢測，以及和目的蛋白融合表達用於檢測目的蛋白的表達和分布。一般來說，GFP抗體不僅可以檢測GFP或其適當的突變體，也可以檢測和GFP或其適當的突變體融合表達蛋白的表達、細胞內定位，以及純化、定性或定量檢測GFP融合表達蛋白等。
GFP標籤可位於蛋白質的C端或N端，該系統已廣泛套用於各種細胞類型，包括細菌、酵母和哺乳動物細胞等，相應的GFP標籤抗體也被廣泛套用。
Myc抗體-抗Myc標籤抗體
隨著蛋白質組學的迅猛發展，重組蛋白質的使用在近年來大大增加。重組雜合體含有一個親和標籤如GST、Myc、His等，可用於輔助目標蛋白的純化，這已經被廣泛使用。利用融合蛋白有助於重組蛋白純化和檢測的這個有點被廣泛認可。在1985年開發出鼠抗c-myc標籤抗體並被作為免疫化學試劑用於細胞生物學和蛋白質工程領域中。Myc標籤（序列為：EQKLISEEDL）已成功套用於WB雜交技術、免疫沉澱IP和流式細胞術中。因此可用於檢測重組蛋白在細菌、酵母、昆蟲細胞和哺乳細胞中的表達情況。
Myc重組蛋白質可通過偶聯Myc標籤抗體到二乙烯碸活化的瓊脂糖上而進行親和純化。Myc標籤可放在C端或N端，但Myc重組蛋白的低pH洗脫條件往往會降低蛋白質的活力，因此Myc標籤系統廣泛套用於檢測但很少用於純化。
HA抗體-抗HA標籤抗體
融合標籤，如HA、His等標籤的使用可以簡化蛋白質的純化過程、控制蛋白質固定的空間取向及方便檢測、使體內生物事件可視化、提高重組蛋白質的產量、增強重組蛋白質的可溶性和穩定性等。常用的標籤包括myc、HA、Flag、His、GST等。其中HA標籤系統利用一個HA (influenza hemagglutinin epitope: YPYDVPDYA)短肽肽融合到目標蛋白。
HA標籤可位於蛋白質的C端或N端，該系統已廣泛套用於多種細胞類型，相應的HA標籤抗體也被廣泛套用。HA標籤抗體能特異識別C末端或N末端帶有HA標籤(HA-tagged)的融合蛋白。
