雙縮脲反應

雙縮脲反應是肽和蛋白質所特有的，而為胺基酸所沒有的一種顏色反應。一般分子中含有兩個氨基甲酪基（即肽鍵：-CO-NH-）的化合物與鹼性溶液作用，生成紫色或者藍紫色的絡合物。

基本介紹

• 中文名：雙縮脲反應
• 外文名：biuret test
• 說明：肽和蛋白質所特有
• 類別：一種顏色反應
• 產物：紫色或藍紫色絡合物

定義

在鹼性溶液（NaOH）中，雙縮脲（H2NOC－NH－CONH2）能與銅離子（Cu2+）作用，形成紫紅色絡合物（該物質的分子結構式見圖），該反應即雙縮脲反應。

銅溶液作用，就會形成紫色或藍紫色絡合物。

註：除-CO-NH-有此反應外，（-CONH2-）、（-CH2-）、（-NH-）、（-CS-CS-NH2）等基團亦有此反應。

鑑定

由於蛋白質分子中含有很多與雙縮脲結構相似的肽鍵，因此也能與銅離子在鹼性溶液中發生雙縮脲反應，且顏色深淺與蛋白質的含量的關係在一定範圍內符合比爾定律，而與蛋白質的胺基酸組成及分子量無關，故可用雙縮脲法測定蛋白質的含量（藉助分光光度計可減小誤差）。

雙縮脲反應主要涉及肽鍵，因此受蛋白質特異性影響較小。且使用試劑價廉易得，操作簡便，可測定的範圍為1～10mg蛋白質，適於精度要求不太高的蛋白質含量的測定，能測出的蛋白質含量須在約0.5mg以上。雙縮脲法的缺點是精確度低、所需樣品量大。干擾此測定的物質包括在性質上是胺基酸或肽的緩衝液，如TrIs緩衝液，因為它們產生陽性呈色反應，銅離子也容易被還原，有時出現紅色沉澱。

注意事項

雙縮脲試劑由NaOH溶液（0.1g/mL）和CuSO4溶液（0.01g/mL）配製而成，配製比例為5：1。但是雙縮脲試劑不用現配現用，先加入NaoH營造鹼性環境，再加入CuSO4。這是與斐林試劑不同的地方。