瑞氏染液

使用方法

瑞氏（Wright's stain；美藍－伊紅Y）染色：

1．瑞氏染料是由鹼性染料美藍（Methvlem blue）和酸性染料黃色伊紅（Eostm Y）合稱伊紅美藍染料即瑞氏（美藍－伊紅Y）染料。

2．用甲醇作瑞氏染料溶劑，即成瑞氏染液。甲醇是瑞氏染料良好溶劑，有兩種作用：

（1）甲醇使瑞氏染料中美藍（M）與伊紅（E）在溶液中離解，可使細胞成分選擇性吸附其中的有色物質而著色。

甲醇

ME（瑞氏染料）----→M+ + E-

在配製的瑞氏染液中美藍如放置過久即可氧化而含有天青，美藍天青與伊紅化合物能使核染成紫紅色，但不能使胞漿染為藍色，多餘美藍就可以使胞漿染成藍色，染色主要是化學作用，是離子彼此結合的反應。

（2）甲醇具有強大的脫水力，可將細胞固定在一定形態及增加細胞結構的表面積，提高細胞對染料吸收作用，同時由於甲醇吸附染色液中的水，使染色液升溫，加速染色反應。

(1) 瑞氏染液配製：

甲醇（AR） 500ml或600ml

○先稱乾燥（事先放入溫箱乾燥過夜）瑞氏染料放置乳缽內，用乳棒輕輕敲碎染料成粉末，再行研磨至聽不到研芝麻聲即呈細粉末，加少許甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸內顯“一面鏡”光澤，而無染料粉粒沉著。

○再加較多量甲醇研磨呈一面鏡光亮，靜置片刻，將上層液體倒入一清潔儲存瓶內（最好用甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重複數次，至乳缽內染料及甲醇用完為止，搖勻，密封瓶口。

○存室溫暗處，儲存愈久，則染料溶解、分解就越好，一般儲存3個月以上為佳。

●緩衝液作用：

○染色對氫離子濃度是十分敏感的，據觀察pH值的改變，可使蛋白質與染料形成的化合物重新離解。

○緩衝液須保持一定的pH使染色穩定，PBS的pH 一般在6.4~6.8，

○偏鹼性染料可與緩衝液中酸基起中和作用，偏酸性染料則與緩衝液中的鹼基起中和作用，使pH恆定。

（pH6.4~6.8，弱酸性）：

配方1 ：　配方2：

1% KH2PO4 30ml 　M/15 KH2PO4 73.5 ml

1% Na2HPO4 20ml 　 M/15 Na2HPO4 26.5ml

H2O(新鮮) 　加至1000ml

置室溫黑暗處，瓶口密封，防止黴菌污染，如有污染則應報廢。

姬姆薩（Giemsa's stain；天青-伊紅）染色

1．姬姆薩染料是伊紅(AzurII Eqsin)和天青（藍）2號合成的。

2．姬姆薩染料（ Giemsa, 天青-伊紅）染液配製：

姬姆薩染料（粉末）　0.5g或7.5g

甲醇（AR）　33ml 或500ml

甘油（AR）　33ml或 500ml