PCR技術

PCR技術是模擬體內DNA的天然複製過程,在體外擴增DNA分子的一種分子生物學技術,主要用於擴增位於兩段已知序列之間的DNA區段。在待擴增的DNA片段兩側和與其兩側互補的兩個寡核苷酸引物,經變性、退火和延伸若干個循環後,DNA擴增2n倍。

PCR的每個循環過程包括高溫變性、低溫退火、中溫延伸三個不同的事件:(①變性:加熱使模板DNA在高溫下(94℃左右)雙鏈間的氫鍵斷裂而形成兩條單鏈;②退火;使溶液溫度降至50~60℃,模板DNA與引物按鹼基配對原則互補結合,③延伸:溶液反應溫度升至72℃,耐熱DNA聚合酶以單鏈DNA為模板,在引物的引導下,利用反應混合物中的4種脫氧核苷三磷酸(dNTP),按5'一3’方向複製出互補DNA。

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