基本介紹
- 中文名：數字PCR
- 外文名：Digital PCR
- 主要廠家：Bio-Rad、Life technologies
- 套用領域：單細胞分析、癌症早期診斷等
簡介,技術發展,原理,
簡介
在定量PCR時，我們常常糾結一個問題，究竟是相對定量還是絕對定量呢？如今，你無需糾結了，因為數字PCR（digital PCR）來了。儘管這兩種技術有些類似，都是估計起始樣品中的核酸量，但它們有一個重要的區別。定量PCR是依靠標準曲線或參照基因來測定核酸量，而數字PCR則讓你能夠直接數出DNA分子的個數，是對起始樣品的絕對定量。因此特別適用於依靠Ct值不能很好分辨的套用領域：拷貝數變異、突變檢測、基因相對表達研究（如等位基因不平衡表達）、二代測序結果驗證、miRNA表達分析、單細胞基因表達分析等。
技術發展
20 世紀末，Vogelstein 等提出數字PCR( digitalPCR，dPCR) 的概念，通過將一個樣本分成幾十到幾萬份，分配到不同的反應單元，每個單元至少包含一個拷貝的目標分子( DNA 模板) ，在每個反應單元中分別對目標分子進行PCR 擴增，擴增結束後對各個反應單元的螢光信號進行統計學分析。
數字PCR技術不斷發展，Bio-Rad、LIFE Technologies及RainDance等廠家相繼推出技術較為成熟的數字PCR產品。
QuantaLife公司開發出的微滴數字PCR技術。該產品還獲得了2011年度Frost & Sullivan北美新產品創新獎。2011年10月，Bio-Rad公司收購了QuantaLife和ddPCR技術，相繼推出了QX100、QX200微滴式數字PCR系統。
與其他數字PCR技術不同，Bio-Rad對樣品進行微滴化處理。據該公司基因表達部門的銷售經理Richard Kurtz介紹，他們的獨特優勢是能夠產生非常均一、重複的1納升液滴。這樣的好處是每個樣品形成20,000個液滴，而其他系統只能分成760-3,000個部分。分得越多，則意味著分析越準確。
數字PCR是一種核酸分子絕對定量技術。當前核酸分子的定量有三種方法，光度法基於核酸分子的吸光度來定量；實時螢光定量PCR（Real Time PCR）基於Ct值，Ct值就是指可以檢測到螢光值對應的循環數；數字PCR是最新的定量技術，基於單分子PCR方法來進行計數的核酸定量，是一種絕對定量的方法。主要採用當前分析化學熱門研究領域的微流控或微滴化方法，將大量稀釋後的核酸溶液分散至晶片的微反應器或微滴中，每個反應器的核酸模板數少於或者等於1個。這樣經過PCR循環之後，有一個核酸分子模板的反應器就會給出螢光信號，沒有模板的反應器就沒有螢光信號。根據相對比例和反應器的體積，就可以推算出原始溶液的核酸濃度。
