核酸檢測

愛滋病核酸檢測包含HIV-1 DNA檢測和HIV-1 RNA檢測，直擊愛滋病病毒的RNA或DNA結構，檢測血液中是否存在病毒核酸，診斷有無病原體感染。採用PCR技術，使用分子生物學實驗室通用的擴增試劑和自行研究開發設計的複合引物，覆蓋常見的HIV毒株，具有很高的靈敏度。使用二次擴增的套式PCR擴增方法，提高檢測的特異性，降低假陽性的機率。核酸檢測將愛滋病病毒的檢測視窗期縮短至11天，並且核酸檢測這項技術目前可將B肝、C肝病毒的檢測“視窗期”分別由原來的50天、72天縮短到25天、59天。

基本介紹

• 中文名：核酸檢測
• 目標：RNA或DNA結構
• 方法：PCR擴增方法
• 領域：醫學

檢測技術

HIV基因結構

HIV基因組由兩條單鏈RNA組成，每個RNA基因組約為9.7k，在RNA5′端有一帽結構（m7G5ppp5′GmpNp），3′端有poly（A）尾巴。HIV的主要基因結構和組合形式與其他反轉錄病毒相同，均由5′末端長重複（long terminal repeat，LTR）、結構蛋白編碼區（gag）、蛋白酶編碼區（pro）、具有多種酶活性的蛋白編碼區（pol）、外膜蛋白（env）和3′末端的長重複LTR區組成。

核酸提取均採用磁珠法。

1）磁珠提取的原理：

將磁珠上標記特異性吸附核酸的物質特異性吸附核酸，並通過磁分離技術將病毒核酸從裂解液中提取出來。

2）步驟：

裂解—吸附—洗滌—洗滌—洗滌—洗脫

3）優點：

a.磁珠提取特異性高，受標本因素影響小，靈敏度高

b.易於實現自動化

4)缺點：

a.成本較高、並需要一定的儀器(半自動、全自動)。

b.完全手工工作，工作量太大。

套用套式聚合酶鏈反應(nPCR)檢測技術

根據HIV-1 gag.pol和env基因序列設計了套式聚合酶鏈反應(nesled polymerasechain reaction，nPCR)引物。將外周血單個核細胞裂解液先用外側引物擴增，其產物再經內側引物擴增，直接走凝膠電泳判定結果。nPCR的敏感性。較常規PCR高100～1000倍，可檢測到0.5fg質粒DNA和50μ1HIV-1感染者外周血樣中的HIV基因。

根據專業文獻記載，用本法檢測63名HIV-1感染者全為陽性，而61名健康人和可疑者均為陰性，後者經追蹤檢測抗體排除了HIV-1感染。

由此可知，nPCR是一種敏感性極高、特異性很強、操作簡便易行的HIV-1基因檢測技術。它已經在早期診斷和外周血病毒含量檢測中發揮了重要作用，而且有著更廣闊的套用前景。

愛滋病核酸檢測的優點

人體感染愛滋病病毒後，一般需要2-12周，平均42天左右血液中才可檢測到HIV抗體。在這段時期內，常規檢測技術根本無法檢測出HIV病毒，這就是常說的“HIV視窗期”。“視窗期”的存在，也解釋了為什麼一些病人在接受了正規醫院輸血後卻感染愛滋病的原因。

在感染過程中，首先出現的是病毒RNA，這時可以用PCR的方法檢測出來，之後出現的是IgM抗體，使用雙抗原夾心法即可以檢測出來，然後出現的是IgG抗體，使用間接法可以檢測出來。

現在省市疾病控制中心和檢測試紙，使用的檢測方法都是檢測抗體抗原，無法避免“HIV視窗期”因素的干擾。所以說，常規檢測技術在HIV視窗期記憶體在重大缺陷。

檢測意義

有些人認為愛滋病既然無法治癒，查出來也沒用，不願進行核酸檢測。實際上，早期診斷、早期治療不僅有利於延緩病情發展，提高生活質量，還可及時保護他人免受感染，有利於愛滋病的控制。

1、解決愛滋病病毒感染的“視窗期”問題

原來的HIV免疫學檢測方法都存在一定的視窗期。愛滋病病毒在進入人體後，機體需要經過一段時間才會產生抗體，在此期間血液抗體檢測呈陰性，抗原抗體通常是在感染後3—6周后才能被檢測出來，時間上較久，而且在準確度上會大打折扣。在視窗期雖測不到HIV抗體，但體內已有HIV，因此視窗期同樣具有傳染性。

在血液篩查方面，愛滋病病毒核酸檢測無疑可以增加血液的安全性。國家相關法律規定，由視窗期血源引起的感染不屬於醫療事故。原來的免疫學檢測方法都存在一定的視窗期，這樣給血液安全帶來很大的威脅。在目前EIA試劑檢測後，美國幾種主要經血傳播病毒的“視窗期”分別為：HIV 22天，HTLV 51天，HCV 72天，HBV 63天；輸血後病毒危險性分別為1:493 000，1:641 000，1:103 000和1:63 000。在美國，愛滋病病毒核酸檢測已經常規用於HIV 和HCV篩查。這樣做大大降低了輸血後感染HIV病毒的殘餘危險性。

2、及早發現，早期藥物預防，降低感染幾率

進行HIV病毒核酸檢測，能及早發現感染，在HIV病毒入侵兩周內，及時注射丙種球蛋白抑制HIV，可以降低被感染的幾率。

愛滋病病毒是逆轉錄病毒，所謂逆轉錄病毒是它在侵入宿主細胞後，以自己的單鏈RNA為模板，按照鹼基互補配對原則，在逆轉錄酶的作用下，合成cDNA，新合成的cDNA插入宿主的核DNA中，隨宿主DNA複製、轉錄、翻譯達到擴增目的病毒。丙種球蛋白是逆轉錄抑制劑，就是阻止HIV逆轉錄宿主DNA過程的藥物。及時發現，儘早治療，能降低被感染的幾率，也能增強機體對HIV 的特異性細胞和體液免疫應答，縮短潛伏感染的半衰期，維持CD4+ 細胞的功能，減緩愛滋病的病程進展。

美國《時代》雜誌網站近日發布了“2011年十大醫學突破”評選結果。其中有一項即為“愛滋病防治的新進展”。新研究發現，抗逆轉錄病毒（ARV）藥物不僅幫助愛滋病患者抗擊HIV，還能讓健康人遠離愛滋病毒。美國華盛頓大學一項涉及4758名參試者的研究發現，服用該藥的健康者HIV感染率降低73%。

3、快速排查感染隱患，解除恐艾心理壓力

近年來，隨著愛滋病的迅猛發展，有許許多多的人患上了這種愛滋病恐懼症。恐懼，是人類的一種本能的反應，適度的恐懼對人類的生存是有利的，但不必要的、過分的恐懼卻是有害的，是一種心理異常。

愛滋病恐懼症就是這樣一種心理異常，它包括以下情形：不必要地過分擔心自己會得愛滋病，或者毫無根據地懷疑自己感染了愛滋病，患者同時伴有一些情緒異常和行為異常，嚴重影響其學習、工作、生活及社會交往。

最新新聞

2014年成都市血液中心在全省率先實現血液核酸檢測全覆蓋，有效縮短了血液檢測的“視窗期”，對防控愛滋病等經血液傳播疾病具有階段性重大意義，為市民用血安全增加了一道堅固的技術保障。2015年底，成都市血液中心緊急接受並開展對西藏血液中心，以及樂山、自貢、瀘州等市州中心血站的血液核酸緊急檢測委託任務，為國家衛計委核酸檢測緊急工作任務的完成做出了積極貢獻，得到了國家、省衛計委高度讚揚，確保了2015年底全國範圍核心酸檢測全覆蓋工作目標的完成。

成都市血液中心作為省內唯一的血液中心，掛牌 “四川省血液管理中心”，開展獻血者關愛活動，做好血小板獻血者、稀有血型獻血者、固定獻血者、應急獻血者、無償獻血志願者的隊伍建設。建立應急招募工作機制，成立“稀有血源貯備庫”和“獻血應急隊伍”，2015年共3.2萬人次應急獻血5.7萬個單位，同比2014年增長12.3%。

目前成都市已有41個常年獻血點，常年獻血點與二三圈層設定的16個儲血庫，共同構建了成都市“多點支撐，全域覆蓋”的采供血服務網路。