抗浸出性核抗原抗體

核抗原有3個組成部分:組蛋白、DNA、可溶性核抗原,後者因可溶於磷酸鹽緩衝液(或生理鹽水)中。故名可提取的核抗原(extractable nuclear antigen,ENA)。

基本介紹

  • 別稱:抗浸出性核抗原抗體
  • 英文名稱:extractable nuclear antigen
  • 英文別名:ENA
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概述

核抗原有3個組成部分:組蛋白、DNA、可溶性核抗原,後者因可溶於磷酸鹽緩衝液(或生理鹽水)中。故名可提取的核抗原(extractable nuclear antigen,ENA)。從分子水平識別ENA多肽抗體足20世紀80年代抗核抗體研究的重大進展,現已發現這類抗體有10餘種,抗ENA抗體為其總稱。

別名

抗-ENA抗體

抗浸出性核抗原抗體的醫學檢查

檢查名稱

抗浸出性核抗原抗體

分類

免疫學檢查 > 自身抗體測定

取材

血液

抗浸出性核抗原抗體的測定原理

(1)對流免疫電泳法:為經典的檢測抗ENA抗體(主要包括抗RNP和抗Sm兩種抗體)的方法。其原理是於瓊脂糖凝膠板成對打孔,將待測血清加至陽極側孔內,於電場中泳動20min,再於陰極側孔內加ENA抗原.繼續電泳30min,若待測血清中有相應的抗體存在,即可在兩孔之間的適當位置形成沉澱線。據此來判斷抗ENA抗體的有無。該法主要用於檢測抗Sm和抗U1-RNP抗體,其優點是較瓊脂糖擴散法敏感、快速,可於2h觀察結果。
(2)免疫印跡法:將ENA抗原進行聚丙烯醯胺凝膠電泳(SDS-PAGE),使所含多肽抗原分離;再用電轉印法將抗原轉印於硝酸纖維素膜上。將待測血清與膜條上的抗原反應,用酶標記抗人IgG作為二抗,加酶底物溶液顯色。根據膜條上顯色區帶的位置,參比陽性對照,即可判斷有無某種抗ENA多肽抗體的存在。此法可一次檢測抗Sm、抗U1-RNP、抗SS-A、抗SS-B、抗Jo-1、抗Scl-70和抗核糖體(Rib)等7種多肽抗體。
(3)間接免疫螢光法:實驗基質多採用Hcp-2細胞或靈長類動物肝臟的冷凍切片,其原理可參看本章抗核抗體測定,分別出現各自特定的免疫螢光模式(表1)。

試劑

同間接免疫螢光法。

操作方法

同間接免疫螢光法。

正常值

正常人血清抗ENA抗體均為陰性。

化驗結果臨床意義

抗Sm抗體和抗dsDNA一樣,對SLE有高度特異性,且不論是否活動期,抗Sm均可陽性,可作為SLE的標誌性抗體。但SLE患者中抗Sm陽性者僅占30%左右(20%~40%),故抗Sm陰性時不能排除SLE診斷,抗Sm抗體與臨床症狀和疾病轉歸之間的關係迄今尚無一致意見。抗U1-RNP自身抗體在多種風濕病患者血中均可檢出,SLE患者的陽性率30%~50%;全身性進行性硬化症(PSS)25%~30%;皮肌炎10%~20%,類風濕性關節炎5%~10%,而在混合性結締組織病(MCTD)患者,高滴度的抗U1-RNP抗體檢出率可達100%,這些患者常無其他特異性的自身抗體。因此,高滴度的抗U1-RNP(尤其是高滴度的抗70kD)抗體被認為是MCTD的診斷標誌。抗U1-RNP抗體(抗70kD)陽性與肌炎、食管運動功能障礙、雷諾現象相關,但陽性患者多不發生腎炎。抗SS-A/Ro抗體與幾種自身免疫病相關。最常見於乾燥綜合徵(40%~95%的病例),也見於系統性紅斑狼瘡(20%~60%)及原發性膽汁性肝硬化(20%),偶見於慢性活動性肝炎。抗SS-B/La抗體幾乎僅見於女性患者(29∶1),可出現在乾燥綜合徵(40%~95%的患者)及系統性紅斑狼瘡(10%~20%)患者。在乾燥綜合徵者中,抗SS-A/Ro抗體和抗SS-B/La抗體幾乎總是同時出現。因此抗SS-A和抗SS-B又被認為是乾燥綜合徵的標誌性抗體。抗Scl-70抗體主要見於全身性進行性硬化症(PSS)中的瀰漫型。是該病的標誌性抗體,其陽性率25%~70%,在重型瀰漫型硬皮病患者可高達75%,在CREST綜合徵患者抗Scl-70檢出率僅4%~11%,此抗體陽性者抗著絲粒抗體多為陰性。局限型硬皮病患者,此抗體檢出率很低,僅約20%。抗Jo-1對多發性肌炎(PM)和皮肌炎(DM)有一定價值;抗核糖體(Rib)抗體主要出現於SLE,有人認為也可作為SLE標誌抗體,為狼瘡活動的指標。系統性紅斑狼瘡(SLE)約50%具有抗ENA抗體,主要是抗Sm抗體,而混合結締組織病者呈高頻率,高效價的抗ENA抗體,主要是針對核糖蛋白。若用核糖核酸酶處理ENA,核糖蛋白即被酶解,而Sm抗原不受影響,所以系統性紅斑狼瘡仍保持陽性,而混合結締組織病不再表現抗體活性。Sm抗原對SLE有特異性,對具有抗DNA抗體的患者,若同時具有抗ENA抗體,其預後較好。

附註

(1)在用對流免疫電泳法檢測時,待測血清如含抗U1-RNP和抗Sm兩種抗體,與ENA孔之間可出現兩條沉澱線。靠近陰極側的代表抗U1-RNP抗體,靠近陽極側的代表抗Sm抗體。如只出現一條沉澱線。則需與陽性對照血清參比。以判定其性質。由於Sm抗原可耐56℃ 1h的處理。U1-RNP則否,故也可將ENA抗原加熱處理後再與待測血清作對流免疫電泳,即可判定沉澱線性質。也有文獻報導,套用核糖核酸酶處理U1-RNP。以區別抗Sm或抗U1-RNP抗體。
(2)免疫印跡法的優點是一次可同時檢測7種多肽抗體,但其與對流免疫電泳法或瓊脂雙向擴散法比較,陽性率並無顯著提高(主要原因是其作用的靶抗原多經過熱變性處理,使得原先存在於分子表面的抗原表位發生了改變)。因此相應多肽抗體陰性,並不能排除某種風濕病的存在。

相關疾病

類風濕性關節炎、混合性結締組織病、乾燥綜合徵、系統性紅斑狼瘡、紅斑狼瘡、肝硬化、硬皮病

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