dNTP

dNTP

dNTP,deoxy-ribonucleoside triphosphate(脫氧核糖核苷三磷酸)的縮寫。是包括dATP, dGTP, dTTP, dCTP,等在內的統稱,N是指含氮鹼基,代表變數指代A、T、G、C、U等中的一種。在生物DNA合成中,以及各種PCR(RT-PCR(reverse transcription PCR)、Real-time PCR)中起原料作用。

基本介紹

  • 中文名:dNTP
  • 外文名:deoxy-ribonucleoside triphosphate
  • 別稱脫氧核糖核苷三磷酸
  • 地位:生物DNA合成中
簡介,嘌呤,嘧啶,DNA結構,氫鍵,形成DNA骨幹,儲存液,使用濃度,

簡介

dNTP代表脫氧核糖核苷酸三磷酸。每個dNTP由磷酸基團,脫氧核糖和含氮鹼基組成。有四種不同的dNTP,可分為兩組:嘌呤和嘧啶。

嘌呤

dATP(脫氧腺苷5'-三磷酸)和dGTP(脫氧鳥嘌呤5'-三磷酸)構成嘌呤。
腺嘌呤和鳥嘌呤是嘌呤中的基質,都具有雙環結構。

嘧啶

dTTP(脫氧胸苷5'-三磷酸)和dCTP(脫氧胞苷5'-三磷酸)構成嘧啶。
胸腺嘧啶和胞嘧啶是嘌呤中的特徵,它們都具有單環結構。

DNA結構

DNA的雙螺旋結構由dNTP組成,非常類似於聚合物中的單體單元。如果你解開DNA並想像它是一個階梯,磷酸基團與脫氧核糖糖基團交替組成梯子的兩側,(只有“糖磷酸骨架”這個詞),鹼基會形成梯子的梯級。DNA的一個重要特徵是兩個鹼基通過氫鍵連線形成一個梯級。這種結合將兩條DNA鏈保持在一起。嘧啶類不能配對,嘌呤也不能配對。鹼基配對只能在TA或GC之間進行。這是由Erwin Chargaff發現的。在他的實驗中,他從細胞核中提取DNA並記錄存在的四種核苷酸的量。他發現T的百分比總是等於A的百分比。在G和C之間發現了相同的關係。他還發現A或T的百分比加上G或C的百分比加到100%。這些發現極大地幫助了沃森,克里克,富蘭克林和威爾金斯。

氫鍵

G和C鹼基之間存在三個氫鍵,但A和T鹼基之間僅有兩個氫鍵。
A和T之間只有兩個形式,因為腺嘌呤鹼基的碳2比其附著的氫具有更少的電負性,因此不會在其上產生δ負電荷,這意味著胸腺嘧啶的碳2上的氧不能與其形成氫鍵。氫。
因此,這意味著需要更多的熱能來使DNA變性,這比富含AT的DNA更富含GC。

形成DNA骨幹

如前所述,DNA的主鏈由交替的磷酸和脫氧核糖基團組成。在dna的一條鏈上的相鄰核苷酸之間形成的鍵是磷酸二酯鍵。當一個脫氧核糖的5'或3'碳原子與第一個磷酸上的氧鍵合時形成。這是從每個核苷酸中除去二磷酸的縮合反應。這就是為什麼DNA中發現的核苷酸實際上是dNMPs(脫氧核糖核苷酸單磷酸酯)。
參與DNA的合成參與DNA的合成

儲存液

dNTP溶於pH為7.0的NaOH貯存液中,最初的貯存液可稀釋到10mol/L,分裝後存放在-20℃冰櫃中。dNTP使用濃度在20~200 μmol/L之間。4種dNTP必須等濃度配合以減少錯配誤差。

使用濃度

在PCR反應中,使用低dNTP濃度,可減少非靶位置啟動和延伸時的核苷酸錯誤摻入。一般可根據靶序列的長度和組成來決定最低dNTP濃度。例如在100μl的反應體系中,4種dNTP的濃度為20μmol/L,可基本滿足合成2.6μg DNA或10pmol/L的400bp序列。

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