脫氧核糖核苷三磷酸

脫氧核糖核苷三磷酸 發明涉及人工合成DNA的必備前體原料的製備方法。

基本介紹

• 中文名：脫氧核糖核苷三磷酸
• 外文名：deoxyribonucleoside triphosphate(dNTP)
• 類別：化學
• 申請：郭煥芳　
• 代理人：杜澄心　

基本信息

申請專利號CN00100844.7　
專利申請日2000.02.17　
名稱脫氧核糖核苷三磷酸的製備方法　
公開（公告）號CN1269422
公開（公告）日2000.10.11　
類別化學；冶金
頒證日　
優先權
申請（專利權）郭煥芳　
地址102413北京市275信箱92分箱　
發明（設計）人郭煥芳　
國際申請
國際公布
進入國家日期　
專利代理機構北京市科技專利事務所　
代理人杜澄心

摘要

本發明涉及人工合成DNA的必備前體原料的製備方法。本發明採用酶解—酶促—化學合成全新工藝。採用天然DNA經溶液態脫氧核糖核酸酶的酶解可得到DNMP，DNMP收率為70—90%。DNMP在經DNMP酶反應一步後結合化學反應，可分別轉化為相應的DNTP，經層析法純化，以鈉鹽或鋇鹽的形式沉澱分離，可以得到純度為95%—97%的DNTP。本發明不僅使DNTP的生產工藝變的簡單，而且使生產量達到了摩爾級，適於工業生產，並且污染性極小。

主權項

權利要求書1．一種脫氧核糖核苷三磷酸的製備方法，包括以下步驟：（1）酶解：DNMP酶製備的培養基的基本組成和含量為5——10%的細菌培養用酵母提取物、0．5—2%的蛋白腖、4—6%的磷酸二氫鉀、2—5%的磷酸氫二鉀、10—15%的葡萄糖、0．5—3%的尿素、0．2%的氯化鈣、0．2%的氯化鋅，餘量為水溶液；以上培養基經滅菌、接種、收集和萃取直接獲得；萃取液不經純化可直接使用；將商品DNA分散在水中製得DNA水溶液，在所述DNA溶液中加入鋅離子使其濃度達到2×10—2—1×10—4M，根據脫氧核糖核酸酶的活性加入其量，酶解在30—55℃下進行；酶解5—15小時；（2）酶促：DNMP水溶液用10M的氫氧化鉀溶液調節PH為4—8，加入磷酸鹽，再加入金屬離子，用ATP作催化劑，根據DNMP酶的活性加入DNMP酶，50—55℃保溫48—96小時；（3）化學合成：酶促反應完成後，加入等量的醇類溶劑，2—5倍量的磷酸或磷酸鹽，20—40倍量的DCC，80—90℃下反應4—8小時；所得混合液為磷酸鹽，DNMP、DNDP、DNTP和多磷化合物；該溶液經過層析分離可得到純淨的DNTP。

外顯子松果腺分子雜交