Semi-quantitation RT-PCR

半定量反轉錄-聚合酶鏈反應(semi-quantitative reverse transcription and polymerase Chain reaction ,SqRT-PCR)是近年來常用的一種簡捷、特異的定量RNA測定方法。

半定量反轉錄-聚合酶鏈反應通過mRNA反轉錄成cDNA,再進行PCR擴增,並測定PCR產物的數量,可以推測樣品中特異mRNA的相對數量。以半定量RT-PCR為基礎建立起來的mRNA含量測定技術,較含內標化的RT-PCR定量測定的mRNA的方法更為簡便可行。
測定體內目的基因的表達增加減少與否,即通過目的基因跑出來的電泳帶與管家基因(如β-actin)的電泳帶的相對含量比較,觀測目的基因表達增減,另外還要做一個β-actin的內參照對照。管家蛋白(House Keeper)基因即細胞內一些表達比較穩定的基因,如β-actin在各種細胞內的含量都穩定在10%左右。因此研究的目的基因的表達量與這些比較恆定含量的基因進行比較,就可以觀察到目的基因是否隨著時間而改變。

相關詞條

熱門詞條

聯絡我們