Leifson氏法分為兩種不同類型的方法，都有Leifson命名。分別為莢膜染色法、鞭毛染色法。
莢膜是包圍在細菌細胞外面的一層粘液性物質，其主要成分是多糖類，不易被染色，故常用襯托染色法，即將菌體和背景著色，而把不著色且透明的莢膜襯托出來。莢膜很薄，易變形，因此，製片時一般不用熱固定。
莢膜染色主要用於炭疽桿菌病料的莢膜檢查。因為炭疽桿菌莢膜系由d-谷氨酸組成的多肽所構成，而菌體的主要成分則為核蛋白，因二者著色力不同，染色水洗後，則可把莢膜上一部分染料沖洗掉，顏色變淡，故顯微鏡檢查時，在著色較深的菌體周圍看到一圈呈淡紫色的膜，即莢膜。又因鹼性美蘭是一種多染性染料，故菌體染為藍色，莢膜則染成淡薔薇色。
基本介紹
- 中文名：Leifson氏法
- 外文名：Leifson's method
- 方法1：莢膜染色法
- 方法2：鞭毛染色法
- 套用1：用於炭疽桿菌病料的莢膜檢查
- 套用2：鞭毛的有無、多少和著生方式
簡介,莢膜染色法原理,莢膜染色法,鞭毛染色法原理,鞭毛染色法,
簡介
Leifson氏法分為兩種不同類型的方法，都有Leifson命名。分別為莢膜染色法、鞭毛染色法。
莢膜染色法原理
莢膜是包圍在細菌細胞外面的一層粘液性物質，其主要成分是多糖類，不易被染色，故常用襯托染色法，即將菌體和背景著色，而把不著色且透明的莢膜襯托出來。莢膜很薄，易變形，因此，製片時一般不用熱固定。
莢膜染色主要用於炭疽桿菌病料的莢膜檢查。因為炭疽桿菌莢膜系由d-谷氨酸組成的多肽所構成，而菌體的主要成分則為核蛋白，因二者著色力不同，染色水洗後，則可把莢膜上一部分染料沖洗掉，顏色變淡，故顯微鏡檢查時，在著色較深的菌體周圍看到一圈呈淡紫色的膜，即莢膜。又因鹼性美蘭是一種多染性染料，故菌體染為藍色，莢膜則染成淡薔薇色。
莢膜染色法
1.塗片：在潔淨無油膩的玻片中央放一小滴蒸餾水（或用接種環挑1-2滴水），用無菌的接種環挑取少量菌種與水滴充分混勻，塗成極薄的菌膜，塗布面積約1cm2 。
2.乾燥：塗片在室溫下使其自然乾燥，也可以小心地在酒精燈上高處微微加熱，使水分蒸發，但切勿緊靠火焰或加熱時間過長，以防標本烤枯而變形。
3.固定：手執玻片一端，有菌膜的一面朝上，通過微火三次（手指觸摸反面不燙手為宜），待玻片冷卻後，再加染色液。
4.染色：玻片置於玻片擱架上，加適量（以蓋滿菌膜為度）草酸銨結晶紫（或石炭酸復紅染液）於菌膜部位，染色1-2min。
5.水洗：斜置載玻片，在自來水龍頭（或洗瓶）下用小股水流沖洗，直至洗下的水呈無色為止。
6.乾燥：自然乾燥或用吸水紙吸去塗片上的水，用吸水紙時切勿將菌體擦掉。
7.鏡檢：用高倍鏡和油鏡觀察並繪細菌形態並繪圖於記錄表中。
鞭毛染色法原理
鞭毛的有無、多少和著生方式是細菌鑑定中的重要指標。在一般情況下，細菌的鞭毛因為太細(直徑為10～20nm)，故普通光學顯微鏡下無法觀察。但通過特殊染色方法使染料沉積在鞭毛上使其加粗，就可克服上述困難。
鞭毛染色法
配製染料KAl(SO4)2飽和水溶液20ml，20%鞣酸10ml，蒸餾水10ml，95%乙醇15ml，鹼性復紅(95%乙醇飽和溶液)3ml。依次加人後充分混勻，放入試劑瓶中蓋緊(可保存1周)。染色操作：製備良好的塗片；滴加染液，30℃左右放置10Min；自來水洗；在室溫下用硼砂美藍(美藍0.18、硼砂1g加蒸餾水100ml配成)復染(也可省略此步)；自來水洗淨、氣乾和鏡檢。結果鞭毛紅色，細胞藍色。
