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簡介
specificPCR,MSP)技術和逆轉錄PCR(RT-PCR)技術分別檢測54例膀胱癌患者癌組織及45例相應癌周正常組織、3例非腫瘤患者的正常膀胱組織中BLU基因啟動子甲基化狀態和轉錄水平。結果①31.5%(17/54)膀胱癌組織中BLU基因高甲基化,相應癌周正常組織和3例正常膀胱組織均未發現該基因高甲基化改變;②甲基化狀態與膀胱癌臨床病理參數無明顯相關性;③在45例膀胱癌組織中,BLU表達缺失率為42.2%(19/45);④BLUmRNA表達缺失與腫瘤臨床分期和病理分級相關(P..
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能在E.coli中發揮作用的啟動子很多。這些啟動子必須具有適合高水平蛋白質合成的某些特性。首先啟動子的作用要強，待表達基因的產物要占或超過菌體總蛋白的的10-30%；第二，它必須表現最低水平的基礎轉錄活性。若要求大量的基因表達，最好選用高密度培養細胞和表現最低活性的可誘導和非抑制啟動子。如果所表達的蛋白具有毒性或限制宿主細胞的生長，選用可抑制的啟動子則至關重要[27，28]。例如，輪狀病毒的VP7蛋白能有效地殺死細胞，因此必須在嚴格控制的條件下表達。但在某些情況下，啟動子的嚴格性並不合理，因為即使最小量的基因產物也能由於其毒性而殺死細胞。如能滅活核糖體或破壞膜滲透壓的分子對細胞來說是致死性的。對宿主的毒性並不僅限於外源基因，某種自身蛋白的過量表達也能造成同樣的結果。如編碼外膜磷脂蛋白的traT基因。另外，不完全抑制的表達系統會造成質粒的不穩定，細胞生長速度的下降和重組蛋白產量的降低[32，33]。Lanzer和Bujard曾對常用的lac啟動子-操縱子系統進行了廣泛的研究，證明操縱子放在啟動子序列的不同位置會造成70倍差異的抑制。將17bp的操縱子置於-10和-35六聚體區之間所形成的抑制比將其放在-35區的上游或-10區的下游要高50-70倍。啟動子的第三個特性是其簡便和廉價的可誘導性。大量生產蛋白質最常用的啟動子是熱誘導（λPL）和化學誘導(trp)啟動子。異丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）誘導的雜交啟動子tac或trc都是強啟動子，在基礎研究中套用很廣。但在大量生產人用治療性蛋白時用IPTG做誘導劑是不可取的，因為IPTG具有毒性而且價格昂貴。IPTG的這些不足至今仍限制tac或trc強啟動子在大量生產人用治療性蛋白中的套用。編碼熱敏lac阻遏蛋白的突變lacI（Ts）基因的出現使得能夠對這些啟動子進行熱誘導[39，40]。另外，還出現了一些新型載體，它們允許在30℃對trc啟動子進行嚴緊調節。還報導了兩種不同的lac阻遏蛋白突變體，能夠同時允許熱誘導和IPTG誘導[41，42]。儘管野生型lacI基因也能熱誘導，但不能對其進行嚴緊型調節，且不能用於lacIq菌株，因為溫度的變化不能遏制由lac阻遏蛋白的過量表達所造成的嚴緊性抑制。因此，該系統只能用用於生產對宿主菌無害的一些蛋白。
冷反應啟動子儘管不象其他啟動子那樣得到廣泛的研究，但已經被證明能在低溫條件下進行有效的基因表達。噬菌體λPL啟動子的活性在20℃時最高，隨著溫度的升高，其活性逐漸降低。PL啟動子的冷反應由E.coli整合宿主因子，一種與DNA結合的序列特異性多功能蛋白來正調控[45，46]。主要冷應激基因cspA啟動子同樣也被證明在低溫具有活性。對cspA和PL啟動子進行分子剖析，鑑定了在較低溫度下參與增強轉錄的特異性DNA區域。從而開發了一系列在20℃低溫具有高活性的PL衍生啟動子。選用冷反應啟動子的基本原理是在15-20℃的條件下，蛋白質的摺疊速度只受到輕微的影響，而作為生物化學反應，轉錄和翻譯的速度將被充分降低。這就為蛋白質摺疊、產生有活性的蛋白和避免非活性蛋白聚合體即包涵體的形成提供了充足的時間，而目的蛋白的最終產量並未減少。一些啟動子具有諸多誘人之處,為選擇新的高效表達系統提供了方便。如非常強的pH啟動子[49，50],重組蛋白的產量可達總蛋白的40-50%。但表達的水平會因不同的基因而有差異。因為蛋白質的合成不僅依賴於啟動子的強弱，而且有賴於轉錄的效率。
人們通常只考慮E.coli啟動子的核心區域，即-10和-35六核苷酸區和一15-19bp的間隔序列。但有人提出核心序列以外的元件也能刺激啟動子的活性。許多研究也已證明，核心啟動子上游的序列能夠在體內提高轉錄起始的效率[53，54，55]。Gourse等證明，位於E.colirRNA啟動子rrnBP1-35區上游的DNA序列即UP元件，能夠在體內和體外提高轉錄效率30倍。UP元件是作為一個獨立的啟動子組件發揮作用的，因為將其融合到其他啟動子如lacUV5中也能刺激轉錄[57,58]。UP元件與其他啟動子融合所表現的這種轉錄增強子效應，使其有望通用於高效表達系統。儘管已經證明rRNA啟動子P1、P2的超強能力，但它們仍未被用於E.coli進行高水平表達，其主要原因是難以對其進行調控。rRNA的體內合成從屬於細胞增殖速度的控制。在細胞快速增殖期，P1和P2是活化的，當細胞處於生長的靜息期，則P1、P2被負調節。因此，rRNA啟動子在前誘導期將持續活化。在體內快速增殖的細胞中，P2的活性很弱，而且可誘導性差，但若與P1分開，P2啟動子的活性明顯升高（達到P1的70%），且對應激反應敏感。這表明在天然的串聯體中，P2是部分關閉的。Brosius和Holy將lac操縱子序列插入到rrnBrRNAP2啟動子的下游，在帶有lacIq基因的菌株中成功地抑制了P2的活性。轉錄活性是以氯黴素乙醯轉移酶的產生和4.5sRNA的表達為標準的。然而，P2構建體的活性只相當於tac啟動子活性的1/2，而且當rrnBP1啟動子被置於P2啟動子下游時，不能完全抑制轉錄。有人試圖利用反轉啟動子的方向來嚴格調控rRNA啟動子。將rRNA啟動子克隆於目的基因的上游，但轉錄方向相反。利用λ整合位點和可調控的λ整合酶來實現啟動子的反轉，從而達到進行誘導的目的，而且，在高度活化的啟動子上游有一強轉錄終止子將避免在前誘導期可能出現的載體的不穩定性。
