酯酶染色是以酯酶催化底物水解的產物與重氮鹽偶聯產生沉澱為原理，用重氮偶聯法顯示血細胞酯酶，對胞質內酶進行定性及反應強度的判斷。不同血細胞內含有的酯酶不同，可分為特異性酯酶（SE）和非特異性酯酶（NSE），SE指氯乙酸AS-D萘酚酯酶，NSE可根據pH值分為酸性NSE（酸性α-醋酸萘酚酯酶）、鹼性NSE（α-丁酸萘酚酯酶）、中性NSE（α-醋酸萘酚酯酶、醋酸AS-D萘酚酯酶等）。
基本介紹
- 中文名：酯酶染色
- 操作方法：固定、染色、復染、氟化鈉抑制
- 臨床意義：可進行急性白血病的鑑別診斷
操作方法,注意事項,正常參考值,臨床意義,
操作方法
1.固定
根據不同的酯酶配置不同的固定液，將乾燥的骨髓塗片置於固定液中固定一段時間，固定後可水洗，去除固定液。常見的固定液有10%甲醛-甲醇固定液、10%甲醛-生理鹽水固定液、40%甲醛等。
2.染色
取酯酶對應的底物溶於適當溶劑，並與緩衝液、重氮鹽配置成pH合適的作用液，將水洗後的骨髓塗片置於作用液中於37℃環境中作用一段時間，作用後水洗，乾燥。
3.復染
用特定染液進行復染，復染後水洗，乾燥，進行鏡檢。常用的復染染液有蘇木素染液、甲綠水溶液等。
4.氟化鈉抑制試驗
在1mL作用液中加入1.5mg氟化鈉，其餘染色步驟同上，分別油鏡計數，計算出抑制前後的陽性率或積分，可計算抑制率。
根據不同的酯酶配置不同的固定液，將乾燥的骨髓塗片置於固定液中固定一段時間，固定後可水洗，去除固定液。常見的固定液有10%甲醛-甲醇固定液、10%甲醛-生理鹽水固定液、40%甲醛等。
2.染色
取酯酶對應的底物溶於適當溶劑，並與緩衝液、重氮鹽配置成pH合適的作用液，將水洗後的骨髓塗片置於作用液中於37℃環境中作用一段時間，作用後水洗，乾燥。
3.復染
用特定染液進行復染，復染後水洗，乾燥，進行鏡檢。常用的復染染液有蘇木素染液、甲綠水溶液等。
4.氟化鈉抑制試驗
在1mL作用液中加入1.5mg氟化鈉，其餘染色步驟同上，分別油鏡計數，計算出抑制前後的陽性率或積分，可計算抑制率。
注意事項
1.α-醋酸萘酚酯酶、醋酸AS-D萘酚酯酶及α-丁酸萘酚酯酶染色需加做氟化鈉抑制試驗並計算氟化鈉抑制率。
2.部分試驗對標本片有較高要求，需在取材後及時進行染色。
3.應保證染色時溫度的穩定，溫度較低時應在37℃溫箱內操作，使基質充分溶解。
4.根據胞質內沉澱染色的顏色深度、面積等對反應強度進行判斷，可分為陰性、弱陽性、陽性、較強陽性、強陽性等。
2.部分試驗對標本片有較高要求，需在取材後及時進行染色。
3.應保證染色時溫度的穩定，溫度較低時應在37℃溫箱內操作，使基質充分溶解。
4.根據胞質內沉澱染色的顏色深度、面積等對反應強度進行判斷，可分為陰性、弱陽性、陽性、較強陽性、強陽性等。
正常參考值
1. 氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色
陽性為細胞質中出現紅色沉澱。
（1）粒細胞系統：分化差的原始粒細胞呈陰性，分化好的原始粒細胞呈陽性，早幼粒細胞至成熟中性粒細胞均呈陽性且與成熟程度無關，嗜酸性粒細胞呈陰性或弱陽性，嗜鹼性粒細胞呈陽性。
（2）其他細胞：單核細胞系統絕大多數為陰性，個別單核細胞系統為弱陽性；淋巴細胞、漿細胞、巨核細胞、幼紅細胞、血小板均為陰性；肥大細胞陽性。
2. 酸性α-醋酸萘酚酯酶染色
陽性為細胞質中出現紅色沉澱。
（1）單核細胞系統：呈強陽性。
（2）淋巴細胞系統：T淋巴細胞陽性，B淋巴細胞多為陰性。
（3）其他細胞：粒系細胞、紅系細胞、巨核系細胞含量較少。
3. α-醋酸萘酚酯酶染色
陽性為細胞質中棕黑色或灰黑色沉澱。
（1）單核細胞系統：分化差的原單細胞呈陰性，分化好的原單細胞呈較強陽性，幼稚及成熟的單核細胞呈陽性，該陽性反應可被氟化鈉抑制。
（2）粒細胞系統：各階段粒細胞呈陰性反應，少數呈弱陽性，該陽性反應不能被氟化鈉抑制。
（3）淋巴細胞系統：各階段淋巴細胞多數呈陰性反應，少數呈弱陽性，該陽性反應不能被氟化鈉抑制。
（4）其他細胞：巨核細胞和血小板呈陽性反應，幼紅細胞大多數呈陰性，少數呈弱陽性，且不能被氟化鈉抑制；漿細胞呈陰性。
4. 醋酸AS-D萘酚酯酶染色
陽性反應為細胞質內出現藍色沉澱
（1）粒細胞系統：原粒細胞呈陰性或陽性反應，早幼粒細胞至成熟中性粒細胞均呈陽性，該反應不能被氟化鈉抑制。
（2）單核細胞系統：原單核細胞呈陰性或陽性反應，幼稚單核細胞和單核細胞均呈陽性，該反應可被氟化鈉抑制。
（3）淋巴細胞：淋巴細胞呈陰性或弱陽性反應，該陽性反應不能被氟化鈉抑制。
（4）紅細胞系統：早期幼紅細胞可呈陽性反應，隨著細胞的成熟陽性反應程度逐漸減弱，該反應不能被氟化鈉抑制。
（5）巨核細胞和血小板均呈陽性反應。
5. α-丁酸萘酚酯酶染色
陽性反應為細胞之內出現紅色沉澱。
（1）粒細胞系統：各階段粒細胞均呈陰性反應。
（2）單核細胞系統：分化差的原單細胞呈陰性反應，分化好的原單細胞呈陽性反應，幼稚及成熟的單核細胞呈陽性反應，該陽性反應可被氟化鈉抑制。
（3）淋巴細胞系統：淋巴細胞呈陰性或陽性反應。
（4）巨核細胞、幼紅細胞、漿細胞呈陰性或弱陽性，組織細胞也可呈弱陽性，但不能被氟化鈉抑制。
陽性為細胞質中出現紅色沉澱。
（1）粒細胞系統：分化差的原始粒細胞呈陰性，分化好的原始粒細胞呈陽性，早幼粒細胞至成熟中性粒細胞均呈陽性且與成熟程度無關，嗜酸性粒細胞呈陰性或弱陽性，嗜鹼性粒細胞呈陽性。
（2）其他細胞：單核細胞系統絕大多數為陰性，個別單核細胞系統為弱陽性；淋巴細胞、漿細胞、巨核細胞、幼紅細胞、血小板均為陰性；肥大細胞陽性。
2. 酸性α-醋酸萘酚酯酶染色
陽性為細胞質中出現紅色沉澱。
（1）單核細胞系統：呈強陽性。
（2）淋巴細胞系統：T淋巴細胞陽性，B淋巴細胞多為陰性。
（3）其他細胞：粒系細胞、紅系細胞、巨核系細胞含量較少。
3. α-醋酸萘酚酯酶染色
陽性為細胞質中棕黑色或灰黑色沉澱。
（1）單核細胞系統：分化差的原單細胞呈陰性，分化好的原單細胞呈較強陽性，幼稚及成熟的單核細胞呈陽性，該陽性反應可被氟化鈉抑制。
（2）粒細胞系統：各階段粒細胞呈陰性反應，少數呈弱陽性，該陽性反應不能被氟化鈉抑制。
（3）淋巴細胞系統：各階段淋巴細胞多數呈陰性反應，少數呈弱陽性，該陽性反應不能被氟化鈉抑制。
（4）其他細胞：巨核細胞和血小板呈陽性反應，幼紅細胞大多數呈陰性，少數呈弱陽性，且不能被氟化鈉抑制；漿細胞呈陰性。
4. 醋酸AS-D萘酚酯酶染色
陽性反應為細胞質內出現藍色沉澱
（1）粒細胞系統：原粒細胞呈陰性或陽性反應，早幼粒細胞至成熟中性粒細胞均呈陽性，該反應不能被氟化鈉抑制。
（2）單核細胞系統：原單核細胞呈陰性或陽性反應，幼稚單核細胞和單核細胞均呈陽性，該反應可被氟化鈉抑制。
（3）淋巴細胞：淋巴細胞呈陰性或弱陽性反應，該陽性反應不能被氟化鈉抑制。
（4）紅細胞系統：早期幼紅細胞可呈陽性反應，隨著細胞的成熟陽性反應程度逐漸減弱，該反應不能被氟化鈉抑制。
（5）巨核細胞和血小板均呈陽性反應。
5. α-丁酸萘酚酯酶染色
陽性反應為細胞之內出現紅色沉澱。
（1）粒細胞系統：各階段粒細胞均呈陰性反應。
（2）單核細胞系統：分化差的原單細胞呈陰性反應，分化好的原單細胞呈陽性反應，幼稚及成熟的單核細胞呈陽性反應，該陽性反應可被氟化鈉抑制。
（3）淋巴細胞系統：淋巴細胞呈陰性或陽性反應。
（4）巨核細胞、幼紅細胞、漿細胞呈陰性或弱陽性，組織細胞也可呈弱陽性，但不能被氟化鈉抑制。
臨床意義
通過不同的酯酶染色可進行急性白血病的鑑別診斷。
1. 氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色
此染色反應特異性強，急性粒細胞白血病的原始粒細胞多呈陽性，急性單核細胞白血病細胞幾乎呈陰性；急性淋巴細胞白血病細胞呈陰性，戈謝細胞和曼尼-匹克細胞為陰性，海藍細胞為陰性或弱陽性，組織嗜鹼細胞為陽性，多發性骨髓瘤細胞為陰性。
2. 酸性α-醋酸萘酚酯酶
此染色反應臨床上主要用於鑑別T、B淋巴細胞。
（1）鑑別T、B淋巴細胞：成熟T淋巴細胞呈點狀顆粒或塊狀陽性，B淋巴細胞大多呈陰性，偶見稀疏、彌散的細小顆粒。
（2）鑑別急性白血病類型：急性T淋巴細胞白血病常呈點狀或塊狀陽性，急性粒細胞白血病常呈陰性或弱陽性，急性顆粒異常增多的早幼粒細胞白血病呈彌散分布的強陽性，急性單核細胞白血病呈彌散分布的強陽性。
3. α-醋酸萘酚酯酶染色
此染色主要用於輔助鑑別白血病類型。急性單核細胞白血病時，單核細胞多數呈陽性反應，且可被氟化鈉抑制，抑制率在50%以上；急性粒細胞白血病時，原粒細胞呈陰性或陽性，陽性反應不能被氟化鈉抑制；急性早幼粒細胞白血病時，早幼粒細胞呈強陽性，陽性反應不能被氟化鈉抑制；急性淋巴細胞白血病時，原始淋巴細胞為陰性反應，急性T細胞型淋巴細胞白血病可見陽性，陽性反應不能被氟化鈉抑制。異常幼紅細胞可呈陽性，陽性反應不能被氟化鈉抑制。巨幼細胞呈陽性反應。
4. 醋酸AS-D萘酚酯酶染色
此染色反應主要用於鑑別急性白血病的細胞類型。
急性粒細胞白血病時，原粒細胞可為陽性反應，該反應不能被氟化鈉抑制；急性早幼粒細胞白血病時，顆粒異常增多的早幼粒細胞呈陽性，該反應不能被氟化鈉抑制；急性單核細胞白血病時，單核系細胞呈陽性反應，並可被氟化鈉抑制；急性粒-單細胞白血病時，部分白血病細胞呈陽性，部分陽性反應可被抑制；急性淋巴細胞白血病時，原有淋巴細胞呈弱陽性或陽性，該反應不被氟化鈉抑制。
5. α-丁酸萘酚酯酶染色
此染色反應是急性白血病常用的細胞化學染色，其特異性較高。急性單核細胞白血病時，單核系細胞大多數呈陽性反應，該反應能被氟化鈉抑制；急性粒細胞白血病時，原粒細胞一般呈陰性反應；急性早幼粒細胞白血病時，早幼粒細胞常呈陰性反應；急性粒-單細胞白血病時，部分白血病細胞呈陽性反應，部分白血病細胞呈陰性反應；急性淋巴細胞白血病時，原始及幼稚淋巴細胞一般呈陰性反應。異常組織細胞也可呈陽性反應，但該陽性反應不能被氟化鈉抑制。
1. 氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色
此染色反應特異性強，急性粒細胞白血病的原始粒細胞多呈陽性，急性單核細胞白血病細胞幾乎呈陰性；急性淋巴細胞白血病細胞呈陰性，戈謝細胞和曼尼-匹克細胞為陰性，海藍細胞為陰性或弱陽性，組織嗜鹼細胞為陽性，多發性骨髓瘤細胞為陰性。
2. 酸性α-醋酸萘酚酯酶
此染色反應臨床上主要用於鑑別T、B淋巴細胞。
（1）鑑別T、B淋巴細胞：成熟T淋巴細胞呈點狀顆粒或塊狀陽性，B淋巴細胞大多呈陰性，偶見稀疏、彌散的細小顆粒。
（2）鑑別急性白血病類型：急性T淋巴細胞白血病常呈點狀或塊狀陽性，急性粒細胞白血病常呈陰性或弱陽性，急性顆粒異常增多的早幼粒細胞白血病呈彌散分布的強陽性，急性單核細胞白血病呈彌散分布的強陽性。
3. α-醋酸萘酚酯酶染色
此染色主要用於輔助鑑別白血病類型。急性單核細胞白血病時，單核細胞多數呈陽性反應，且可被氟化鈉抑制，抑制率在50%以上；急性粒細胞白血病時，原粒細胞呈陰性或陽性，陽性反應不能被氟化鈉抑制；急性早幼粒細胞白血病時，早幼粒細胞呈強陽性，陽性反應不能被氟化鈉抑制；急性淋巴細胞白血病時，原始淋巴細胞為陰性反應，急性T細胞型淋巴細胞白血病可見陽性，陽性反應不能被氟化鈉抑制。異常幼紅細胞可呈陽性，陽性反應不能被氟化鈉抑制。巨幼細胞呈陽性反應。
4. 醋酸AS-D萘酚酯酶染色
此染色反應主要用於鑑別急性白血病的細胞類型。
急性粒細胞白血病時，原粒細胞可為陽性反應，該反應不能被氟化鈉抑制；急性早幼粒細胞白血病時，顆粒異常增多的早幼粒細胞呈陽性，該反應不能被氟化鈉抑制；急性單核細胞白血病時，單核系細胞呈陽性反應，並可被氟化鈉抑制；急性粒-單細胞白血病時，部分白血病細胞呈陽性，部分陽性反應可被抑制；急性淋巴細胞白血病時，原有淋巴細胞呈弱陽性或陽性，該反應不被氟化鈉抑制。
5. α-丁酸萘酚酯酶染色
此染色反應是急性白血病常用的細胞化學染色，其特異性較高。急性單核細胞白血病時，單核系細胞大多數呈陽性反應，該反應能被氟化鈉抑制；急性粒細胞白血病時，原粒細胞一般呈陰性反應；急性早幼粒細胞白血病時，早幼粒細胞常呈陰性反應；急性粒-單細胞白血病時，部分白血病細胞呈陽性反應，部分白血病細胞呈陰性反應；急性淋巴細胞白血病時，原始及幼稚淋巴細胞一般呈陰性反應。異常組織細胞也可呈陽性反應，但該陽性反應不能被氟化鈉抑制。
