紅細胞凝集試驗

凝集種類

（1）由病毒而引起的凝集：G．H．Hirst（1941）發現流感病毒能使雞的紅細胞發生凝集，其後又發現其它各種病毒也能引起同樣的紅細胞凝集反應。即紅細胞表面存在著對各種病毒的受體，病毒與受體結合，以紅細胞為橋樑的結果而引起凝集。利用此反應可以進行病毒的定性和定量。另外，如果存在抗病毒的抗體時，則由病毒引起的凝集作用將被抑制，所以可用於抗病毒抗體的檢出。

（2）由抗體引起的凝集：

（a）如果存在對紅細胞表面決定基的抗體，則紅細胞亦將凝集。可用於測定對抗紅細胞的抗體的效價或鑑定人的血型。

（b）在紅細胞表面，如果人為地使之吸附或結合特定的抗原物質，則與該抗原相對應的抗體將引起紅細胞凝集（被動凝集反應或間接凝集反應，psssive he-magglntination）。

試驗方法

血凝及血凝抑制試驗

有些病毒具有凝集某種(些)動物紅細胞的能力，稱為病毒的血凝，利用這種特性設計的試驗稱血球凝集(HA)試驗，以此來推測被檢材料中有無病毒存在，是非特異性的，但病毒的凝集紅細胞的能力可被相應的特異性抗體所抑制，即血球凝集抑制(HI)試驗，具有特異性。通過HA-HI試驗，可用已知血清來鑑定未知病毒，也可用已知病毒來檢查被檢血清中的相應抗體和滴定抗體的含量。

目的要求

掌握病毒HA和HI試驗的原理和基本操作方法，了解其實用價值。

材料與試劑

1. 96孔“U”形或“V”形微量反應板，50 uL定量移液器，滴頭，微型振盪器。

2. 生理鹽水，0.5%雞紅細胞懸液，新城疫病毒液（尿囊液或凍乾疫苗液），新城疫陽性血清，被檢雞血清。

實驗內容及操作方法

（一）血球凝集(HA)試驗

1. 在96孔微量反應板上進行，自左至右各孔加50 uL生理鹽水。

2. 於左側第1孔加50 uL病毒液（尿囊液或凍乾疫苗液），混合均勻後，吸50 uL至第2孔，依次倍比稀釋至第11孔，吸棄50 uL；第12孔為紅細胞對照。

3. 自右至左依次向各孔加入0.5%雞紅細胞懸液50 uL，在振盪器上振盪，室溫下靜置後觀察結果（表4-1）。

表4-1 病毒血凝試驗的操作方法（單位：uL）

孔號	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
病毒稀釋度	1:2	1:4	1:8	1:16	1:32	1:64	1:128	1:256	1:512	1:1024	1:2048	對照
生理鹽水	50	50	50	50	50	50	50	50	50	50	50	50
病毒液	50	50	50	50	50	50	50	50	50	50	50
0.5%紅細胞	50	50	50	50	50	50	50	50	50	50	50	50
棄50
結果觀察	++++	++++	++++	++++	++++	++++		+++	+	+	-	-

4. 結果判定：從靜置後10 min開始觀察結果，待對照孔紅細胞已沉澱即可進行結果觀察。紅細胞全部凝集，沉於孔底，平鋪呈網狀，即為100% 凝集（++++），不凝集者（-）紅細胞沉於孔底呈點狀。

以100% 凝集的病毒最大稀釋度為該病毒血凝價，即為一個凝集單位。從表4-1看出，該新城疫病毒液的血凝價為1:128，則l:128為1個血凝單位，1:64、l:32分別為2、4個血凝單位，或將128/4=32，即1:32稀釋的病毒液為4個血凝單位。

紅細胞凝集試驗

基本介紹

凝集種類

試驗方法

製備方法

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孔號	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
血清稀釋度	1:2	1:4	1:8	1:16	1:32	1:64	1:128	1:256	1:512	1:1024	病毒對照	血清對照
生理鹽水	50	50	50	50	50	50	50	50	50	50	50
被檢雞血清	50	50	50	50	50	50	50	50	50	50		50
4單位病毒	50	50	50	50	50	50	50	50	50	50	50	50
室溫中靜置 10 min
0.5%紅細胞	50	50	50	50	50	50	50	50	50	50	50	50
棄去50
結果觀察	-	-	-	-	-	-	+	++	+++	++++	++++	-