傳統螢光分析技術缺乏空間分辨能力，即將空間上某一位點信息定位抽取出來的能力。
現代分析化學正向著信息多維化的方向發展，空間分辨的重要性日益受到重視。隨著現代儀器手段的發展，具有空間分辨能力的螢光分析技術已成為現實，隨著套用領域的不斷擴大，正漸趨形成一個新的研究分支——空間分辨螢光分析技術。目前空間分辨螢光分析技術主要包括：共焦螢光法、全內反射螢光法、多光子螢光法以及近場螢光法。這些技術雖然原理各異，但都較傳統技術具有卓越的空間分辨能力，套用到顯微成像上能獲得遠比常規螢光顯微術更好的分辨效果。共焦螢光法利用“針孔”效應，可對樣品進行縱深剖析；全內反射螢光法則可有效排除本體干擾，獲取界面層信息；多光子激發螢光法根據非線性光學原理提高空間解析度；近場螢光法則借用掃描隧道顯微鏡原理，得以突破傳統光學衍射的限制。這些具有空間分辨能力的方法的出現和發展，一是直接導致了單分子水平測定的實現和興起；二是在材料科學、生物科學、醫學等領域展示出巨大的作用。
