剛果紅染色法

剛果紅染色法

剛果紅染色法特指用剛果紅將纖維素染色的方法。剛果紅能與培養基中的纖維素形成紅色複合物,常用的剛果紅染色法有兩種。

基本介紹

  • 中文名:剛果紅染色法
  • 試劑剛果紅
含義,原理,方法,

含義

剛果紅染色法特指纖維素的染色法剛果紅能把纖維素染成紅色複合物,對纖維二糖葡萄糖無作用,可用此來鑑別纖維素或纖維素分解菌的分解作用

原理

剛果紅能與培養基中的纖維素形成紅色複合物。當纖維素被纖維素酶分解後,剛果紅——纖維素的複合物便沒法形成,培養基中會出現以纖維素分解菌為中心的透明圈,通過是否產生透明圈來篩選纖維素分解菌
剛果紅染色法

方法

常用的剛果紅染色法有兩種
方法一,先培養微生物,再加入剛果紅進行顏色反應
在長出菌落的培養基上,覆蓋質量濃度為1 mg/mI。的CR溶液,10~15 min後,倒去CR溶液,加入物質的量濃度為l mol/l的NaCI溶液,15 min後倒掉NaCl溶液,此時,產生纖維素酶的菌落周圍將會出現透明圈。
(加NaCl的原因:剛果紅是結合到培養基的多糖底物,但分解纖維素的細菌可以產纖維素酶,能分解這個多糖底物成為寡糖,這樣剛果紅就不能結合上去了,氯化鈉就可以使結合不牢的剛果紅洗去,這樣就留下大小不一的透明圈,大的透明圈分解纖維素的能力就強)

  
方法二,在倒平板時就加入剛果紅
配製質量濃度為10 mg/mI的CR溶液,滅菌後,按照每200 mI。培養基加入1 mI。的比例加入CR溶液,混勻後倒平板。等培養基上長出茵落後,產生纖維素酶菌落周圍將會出現明顯的透明圈

  
兩種剛果紅染色法的比較 : 剛果紅在篩選纖維素分解菌上的套用已經有超過20年的歷史,課本中給出了兩種方法。
方法一是傳統的方法,
優點:這樣顯示出的顏色反應基本上是纖維素分解菌的作用。
缺點:操作繁瑣,加入剛果紅溶液會使菌落之間發生混雜;
方法二
優點:操作簡便,不存在菌落混雜問題,
缺點1:由於在纖維素粉和瓊脂、土豆汁中都含有澱粉類物質,可以使能夠產生澱粉酶的微生物出現假陽性反應。但這種只產生澱粉酶的微生物產生的透明圈較為模糊,因為培養基中纖維素占主要地位,因此可以與纖維素酶產生的透明圈相區分。
缺點2:有些微生物具有降解色素的能力,它們在長時間培養過程中會降解剛果紅而形成明顯的透明圈,與纖維素分解菌不易區分

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