《miRNA-29a/c調控H3K4甲基化在前列腺癌病理機理中的作用》是依託同濟大學，由吳登龍擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：miRNA-29a/c調控H3K4甲基化在前列腺癌病理機理中的作用
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：吳登龍
- 依託單位：同濟大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
前列腺癌是威脅男性健康的常見腫瘤之一。前期研究我們首先發現，組蛋白H3K4特異性去甲基化酶JARID1B在前列腺癌中高表達；H3K4甲基化狀態與前列腺癌患者預後相關；miRNA晶片篩查發現miR-29a/c在前列腺癌中低表達；通過螢光素酶報告基因實驗發現miR-29a/c和JARID1B基因3-'UTR有結合位點。但在前列腺癌發病中miR-29a/c調控組蛋白去甲基化的分子機制仍不清楚。本項目擬通過上調前列腺癌細胞株中miR-29a/c表達後檢測JARID1B基因表達量及細胞生物學行為改變、構建穩定高表達JARID1B的前列腺癌細胞株並行裸鼠皮下成瘤實驗和前列腺癌標本組織晶片研究，分別從分子水平、組織水平、動物整體水平探討miR-29a/c如何調控JARID1B，改變H3K4甲基化狀態，進而調控前列腺癌細胞的發生、發展。本項目可為尋找前列腺癌新的分子診斷標記和治療靶標提供科學依據。
結題摘要
目的 MiRNAs是一類非編碼小RNA （Ribonucleic Acid,核糖核酸）分子,通常在轉錄後水平調控基因表達，可以介導蛋白質翻譯抑制或mRNA降解。在本次研究中，miR-29a被證實在前列腺癌患者中明顯低表達，KDM5B在前列腺癌細胞中高表達，且生物信息學分析顯示miR-29a與KDM5B的3’-UTR有結合位點。探討在前列腺癌中miR-29a與H3K4 特異性去甲基化酶——KDM5B之間的關係，驗證miR-29a 通過調控KDM5B的表達來抑制前列腺癌細胞的增殖並誘導其凋亡。 方法 將miR-29a 模擬物（miR-29a mimic）片段和含野生型KDM5B基因3’-非翻譯區的螢光素酶報告載體（KDM5B-wt）共轉染至前列腺癌PC3和Lncap細胞後，進行螢光素酶活性檢測。採用脂質體轉染法將miR-29a mimics轉染入人前列腺癌PC3和Lncap細胞中，MTT實驗檢測細胞增殖情況；流式細胞術檢測細胞周期和細胞凋亡；Real-Time PCR和Western印跡法檢測KDM5B表達水平。 結果 1.雙螢光素酶報告實驗證明KDM5B為miR-29a直接調控的靶基因。 2. 基因表達實驗證明良性的前列腺上皮細胞系WPMY-1中的表達明顯低於四種前列腺癌細胞系（PC3/DU145/LNCaP/22Rv1）中KDM5B的表達。 3.轉染miR-29a mimics後，KDM5B的表達被明顯抑制 （P＜0.01），蛋白表達水平也明顯低於NC組。與NC組相比，轉染miR-29a mimics組細胞增殖能力顯著降低（P＜0.01），細胞生長被阻滯在S／G2期，細胞凋亡率較NC組增加（P＜0.01）。 結論 MiR-29a可以通過調控H3K4特異性去甲基化酶---KDM5B的表達而抑制前列腺癌PC3和Lncap細胞的增殖。MiR-29a有希望成為診斷和治療前列腺癌新的分子標記和靶點。
