T4 RNA Ligase，即T4 RNA連線酶，是一種ATP-依賴的可以催化單鏈RNA、單鏈DNA或單核苷酸分子間或分子內5'-P末端與3'-OH末端之間形成磷酸二酯鍵的酶。
基本介紹
- 中文名：T4 RNA連線酶
- 外文名：T4 RNA ligase
- 來源：由大腸桿菌表達
- 純度：不含DNA內切酶和外切酶
- 失活或抑制：70℃加熱10分鐘可失活
簡介,失活抑制,
簡介
T4 RNA Ligase主要用於RNA和RNA之間的連線，連線時需要5'磷酸基團和3'羥基的存在。不僅可以進行RNA分子間的連線，也可以進行RNA分子(最短8個鹼基)的環化連線。
T4 RNA Ligase可以用於RNA和單核苷酸之間的連線，單核苷酸必須為5'和3'均磷酸化的形式，此時常用於RNA的3'末端標記。
T4 RNA Ligase也可以用於DNA和RNA之間的連線。當DNA提供5'磷酸基團，RNA提供3'羥基時，連線效率較高；當DNA提供3'羥基，RNA提供5'磷酸基團時，連線效率非常低。
T4 RNA Ligase也可以用於DNA和DNA之間的連線，但連線效率非常低。主要用於DNA的環化連線，例如5' RACE中的cDNA環化。DNA和DNA之間的連線儘管可以進行，但比較困難。
用途：用RNA 3'末端標記；RNA和RNA分子間連線；寡核苷酸的環化；tRNA修飾；5' RACE中寡核苷酸連線到cDNA單鏈；在蛋白質特定位點引入非天然胺基酸。
來源：由大腸桿菌表達，表達基因的來源為T4嗜菌體。
活性定義：37℃30分鐘內，催化1 nmol 5'-[P]-(A)12-18成為磷酸酶不能消化的環形產物所需的酶量定義為1個活性單位。
活性檢測條件：50mM Tris-HCl(pH7.5)，10mM MgCl2，10mM DTT，1mM ATP，10μM 5'-[P]-(A)12-18(10μM in 5'-termini)。
純度：不含DNA內切酶和外切酶，不含RNA酶，不含磷酸酯酶。
酶儲存溶液：10mM Tris-HCl(pH7.5)，1mM DTT，50mM KCl，0.1mM EDTA，50%(v/v)glycerol。
Reaction Buffer(10X)：500mM HEPES-NaOH(pH8.0 at 25℃)，100mM MgCl2，100mM DTT。
失活抑制
70℃加熱10分鐘可使T4 RNA Ligase失活。
