混合單個核細胞懸液在通過尼龍毛柱時，B細胞、漿細胞、單核細胞和一些輔助細胞被選擇性粘附於尼龍毛上，而多數T細胞則通過尼龍毛柱，這是獲得富含T細胞群的有效方法。
基本介紹
- 中文名：T淋巴細胞分離技術
- 材料：尼龍毛，鋁箔、漏斗
- 試劑：過聚蔗糖—泛影葡胺
- 有效方法：混合單個核細胞懸液粘附於尼龍毛
材料及試劑,操作方法,裝尼龍毛柱,注意事項,
材料及試劑
1．尼龍毛（ Nylon Wool Fiber）。
2．燒杯、鋁箔、漏斗、一次性手套等。
3．裝填尼龍毛柱，一次性注射器。
4．取自然沉降的上層血漿，過聚蔗糖—泛影葡胺分層液後，獲取的血漿和分層液之間的單個核細胞層。
操作方法
1．尼龍毛的清洗與乾燥
（1）戴上已經洗去滑石粉的一次性手套，將尼龍毛（1包或2包，每包35g）放入燒杯中，加入蒸餾水或去離子水，用鋁箔蓋上燒杯並煮沸約10min。
（2）冷卻至常溫，倒入漏斗內，使水滴乾。
（3）重複（1）、（2）步驟6次。
（4）將尼龍毛攤在鋪有紗布的方盤內，37℃溫箱乾燥2～3天后，貯藏在帶蓋的方盤內。
裝尼龍毛柱
（1）取50ml玻璃注射器，拔去注射芯，在注射器頭上套一段帶夾子的膠管。
（2）將尼龍毛梳理，並適當摺疊，以適應注射器的直徑，填入注射器內，約20ml的體積。
（3）將填好尼龍毛的注射器連同注射器芯一起包好，高壓滅菌。
3．細胞分離
（1）將注射器固定在支架上，倒入37℃的細胞培養液，關閉閥門一定時間，然後打開閥門，放掉細胞培養液，以清洗幾次尼龍毛，關上閥門。
（2）將要分離的細胞液用預先加溫的培養液稀釋成適當的濃度，約5.00×107個細胞/ml。
（3）將細胞液倒入注射器內，使之沒過尼龍毛柱。蓋上注射器，37℃溫育45min
至1h。
（4）打開下口，緩慢放流（1滴/min），收集於離心管中。
（5）離心，即獲所需的T淋巴細胞。
（6）關閉注射器下口，於注射器內加入0.85%冰冷生理鹽水，振盪，並套上注射器芯，打開下口，使勁推出注射器內液體，即獲得粘附於尼龍毛上的B淋巴細胞、漿細胞、巨噬細胞等。
注意事項
1．此種分離法，T淋巴細胞也常有一部分被吸附，吸附的多少與尼龍毛的質量有關，與裝柱的鬆緊也有關係。
2．此法的T淋巴細胞的回收率約20%～30%。
3．用過的尼龍毛可回收，以鹽水洗滌，然後浸入0.1Mol/L的HCl中過夜，然後再同前法清洗。
