Sabin-Feldman染色試驗

染色試驗(Sabin—Feldman dye tese,DT)。 是弓形蟲特有的血清學診斷法,此法特異性高而且被認為是標準的診斷方法。

基本介紹

  • 中文名:Sabin-Feldman染色試驗
  • 外文名:Sabin—Feldman dye tese
  • 作用:弓形蟲特有的血清學診斷法
  • 特點 :特異性高
原理,輔助因子,抗原製備,美藍染液,待檢血清,檢測,結果判定,

原理

是活的弓形蟲速殖子與正常血清混合,在37℃作用1h或室溫數小時後,大部分滋養體由原來的新月形變為圓形或橢圓形,細胞質對鹼性美藍具有較強的親和力而被深染。但當弓形蟲與含特異性抗體和補體(輔助因子accessoryfactor.AF)的血清混合時,蟲體受到抗體和補體的協同作用而變性,對鹼性美藍不著色。計算著色與不著色蟲體比例即可判斷結果。

輔助因子

存在於正常人新鮮血清內,不耐熱。用作輔助因子的血清需預先篩選,即將候選血清與弓形蟲速殖子混合,37℃作用1h後,有90%以上蟲體經美藍染色後,著色者即含有輔助因子(AF)。含輔助因子血清可分裝後於一2O℃保存備用。

抗原製備

弓形蟲速殖子經腹腔感染小鼠,3d後抽取腹腔液,生理鹽水洗滌3次(300Or/min×lOmin),收集純淨蟲體。也可將小鼠腹腔懸液用胰酶消化,經G3砂蕊漏斗或纖維素濾膜過濾純化,所獲蟲體用輔助因子血清稀釋至每高倍視野50個左右蟲體,即為抗原液。

美藍染液

美藍10g加入95%乙醇溶液1OOml,濾紙過濾,取3ml加pHll的鹼性緩衝液(O.53%Na2CO39.73ml,1.91%Na2B4O70.27ml)lOml。鹼性緩衝液臨用前配製。

待檢血清

新鮮血清需經56℃30min滅活,或直接用生理鹽水倍比稀釋後,每管0.lm1,4℃中次日使用。
5.

檢測

在稀釋血清內每管加上述抗原懸液0.lml,37℃孵育1h,滴加美藍染液0.O2ml/管,繼續溫育l5min後,自每管取懸液1滴塗片,加蓋玻片鏡檢。

結果判定

計算各管不著色蟲體的百分比,以50%蟲體不著色管的血清稀釋度為該份被檢血清的最高抗體滴度。一般認為,抗體滴度1:8為隱性感染;1:956為活動性感染;1:1024以上為急性感染。
DT所測抗體是蟲體表膜抗原誘導的特異性抗體。本試驗易與肉孢子蟲抗血清發生交叉反應;操作中需用活蟲;輔助因子血清篩選較煩瑣。

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