HRP(辣根過氧化物酶)

通常來源於辣根（因此稱），是臨床檢驗試劑中的常用酶。該產品不但廣泛用於多個生化檢測項目，也廣泛運用於免疫類（ELISA）試劑盒。過氧化物酶作為多個試劑盒顯色體系的關鍵成分，對試劑盒的質量有重要影響。

基本介紹

• 中文名：辣根過氧化物酶
• 外文名：Horseradish Peroxidase, HRP
• 來源：辣根
• 用途：免疫類（ELISA）試劑盒

辣根過氧化物酶(Horseradish Peroxidase, HRP）

辣根過氧化物酶(horse radish peroxidase，簡稱HRP，EC.1.11.1.7)是植物中研究得最深入的一種過氧化物酶，早在20世紀30年代就有人著手從辣根中分離此酶，以後又製備出結晶。通常試驗中以辣根為原料，經過水的抽提，硫酸銨和丙酮分級分離，再經鋅離子純化，透析除鹽，冰凍乾燥，便可得到高純度的辣根過氧化物酶。

辣根過氧化物酶是一種含亞鐵血紅素的蛋白質，HRP廣泛分布於植物界，它是由無色的酶蛋白和棕色的鐵卟啉結合而成的糖蛋白，糖含量18%。HRP由多個同功酶組成，Mr在40000左右，等電點7.2。溶於水，溶解度為5%(W/V)，溶液呈棕紅色，透明。酶催化的最適pH因供氫體不同而稍有差異，但多在pH5左右。酶溶於水和58%以下的硫酸銨溶液。HRP可溶於0.58飽和度以下的硫酸銨溶液，而0.62飽和度以上則不溶。該酶最適pH7.0(對愈創木酚為氫給體而言)。在室溫下，HRP幾周內穩定，加熱到63℃，在15min內穩定。氧化還原電勢很低，pH6.08時，E ' 0 =-0.2070V，pH為7.71時，E′0 =-0.2787V。HRP的輔基和酶蛋白最大吸收光譜分別為403nm和275nm，一般以OD403nm/OD275nm的比值RZ(德文Reinheit Zahl)表示酶的純度。

酶標記物包括酶標記抗原、酶標記抗體和酶標記SPA等。酶標記物質量的好壞直接關係到免疫酶技術的成功與否，因此被稱為關鍵的試劑。酶標記物中最常用的是酶標記抗體，它是將酶與特異性抗體經適當方法連線而成。酶標記抗體的質量主要取決於純度好、活性強及親和力高的酶和抗體，其次要有良好的製備方法。高質量的酶(如辣根過氧化物酶，簡稱HRP)國內已有商品供應。高質量的抗體則可通過提取純化而獲得。在製備方法上，宜選用產率高、不影響結合物的活性和不混雜干擾性物質且操作簡便易行的方法。