ECL(一種化學發光試劑)

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ECL在化學領域,是一種化學發光試劑。electrochemiluminescence
化學發光試劑,
一般是WesternBlot的最後一步,加入1:1的溶液A和溶液B,覆蓋pvdf膜,可以顯色來觀察實驗結果。
原理:
一般使用的發光液A和B分別是魯米諾和過氧化氫,在辣根過氧化物酶(HRP)的催化作用下,魯米諾與過氧化氫反應生成一種過氧化物,過氧化物不穩定隨即分解,形成一種能發光的電子激發中間體,當後者由激發態返回至基態,就會產生螢光。
在發光過程中不需要消耗HRP,HRP只是起催化作用,所以只要HRP沒降解失活,是可以重複加發光液的。但HRP作為一種蛋白酶,在室溫放置時間過長,是會降解的;同時在發光過程中有什麼物質(比如顯影液)污染了膜的話,也有可能滅活膜上的HRP。

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