基本介紹
- 中文名：餵養致畸試驗
- 外文名：Feeding teratogenicity test
常用動物及飼養管理,試劑分組,操作步驟,受試物給予與觀察,受孕檢查,孕鼠稱重,孕鼠處死和檢查,活胎數檢查,胎鼠骨標本製作與檢查,胎鼠內臟檢查,統計處理和結果評價,
常用動物及飼養管理
首選大鼠，雌雄比例為1:1或2:1,大鼠交配時間約12~14周齡，小鼠9~10周齡。
試劑分組
至少設4組，即1個空白對照組（或溶劑對照組）和3個試驗組。試驗組劑量一般選擇在1/10~1/100母體LD50之間。高劑量一般應使母體產生中毒症狀；低劑量應不引起母鼠產生可觀察到的中毒症狀；在高劑量組與低劑量組之間設1個~2箇中劑量組。設1個空白對照組（或溶劑對照組），必要時，還要設陽性對照組。每組孕鼠不能低於12隻。
操作步驟
受試物給予與觀察
一般採用混飼或混飲給予受試物。原則上雄鼠交配前4周~8周開始給予受試物直至交配成功，確證雌鼠受孕為止。雄鼠從交配前2周~4周開始給予受試物至孕期的第13天~第15天。在試驗期間，每天觀察試驗鼠的體徵、行為活動、採食和飲水情況。每周至少稱1次體重，並同時計算採食量。
受孕檢查
雌、雄大鼠按1:1(或2:1)同籠後，每日早晨檢查籠底有無陰道栓（石蠟狀圓柱體）或用浸濕生理鹽水的棉簽取陰道分泌物塗布於滴有1滴生理鹽水的玻片上，置低倍顯微鏡下檢查有無精子。發現陰道栓或精子的當天定為孕期的0 d。一般每組應獲得13~15隻受孕鼠，以保證實驗結束時妊娠母鼠數不少於12隻。
孕鼠稱重
孕鼠於孕期的0d、7d、14d和20d稱重，以觀察孕鼠的體重變化，隨時注意記錄孕鼠的狀況。
孕鼠處死和檢查
大鼠在孕期第20天（小鼠第19天）將孕鼠處死。沿腹中線剖開腹腔，取出子宮。分別檢查並記錄左、右側卵巢黃體數、窩重（子宮連胎鼠）、子宮重、著床數、活胎數、死胎數（含早期及晚期死胎）和吸收胎數。
活胎數檢查
逐個記錄活胎數太重、性別、體長，外觀檢查頭顱外形、面部、軀幹、四肢等有無畸形，包括露腦、腦膨出、眼部畸形（小眼、無眼、睜眼等）、鼻孔擴大、單鼻孔、唇裂、脊柱裂、四肢及尾畸形等。
胎鼠骨標本製作與檢查
將每窩二分之一的活胎（奇數或偶數）放入乙醇固定液中固定2周~3周。取出胎仔（可去皮、去內臟及脂肪）流水沖洗數分鐘，放入至少5倍於胎仔體積的1%~2%氫氧化鉀溶液中作用8h~72h，然後將胎仔放入茜素紅套用液中染色4h~48h，並輕搖1次/d~2次/d，至頭骨染紅為宜。再將胎仔放入透明液A中1d~2d，放入透明液B中2d~3d，待骨骼紅染而軟組織基本褪色為止。將胎仔標本放入小平皿內，用透射光源，在體視顯微鏡下作整體觀察，逐步檢查骨骼。
檢查時先測量囪門的大小、矢狀縫的寬度、頭頂間骨及後頭骨缺損情況，然後檢查胸骨的數目、缺失或融合（胸骨為6個，骨化不完全時首先缺第5胸骨、次缺第2胸骨），檢查肋骨（肋骨通常為12對~13對，常見畸形有融合肋、分叉肋、波壯肋、短肋、多肋、缺肋、肋骨斷裂），檢查脊柱發育、椎體數目（脊椎7個，胸椎12~13個，腰椎5個~6個，骶椎4個，尾椎3個~5個）以及椎骨油污融合、縱裂等，最後檢查四肢骨。
胎鼠內臟檢查
將每窩二分之一的胎鼠放入鮑因固定液中，兩周后作內臟檢查。先用自來水衝去固定液，將鼠仰放在石蠟班上，減去四肢和尾，用刀片從頭部到尾部逐段橫切或縱切。觀察不同切面器官的大小、形狀和相對位置。
以後自腹中線剪開胸、腹腔，依次檢查心、肺、橫膈膜、肝、胃、腸等臟器的大小、位置，查畢將其摘除，再檢查腎臟、輸尿管、膀胱、子宮和睪丸位置及發育情況。然後將腎臟切開，觀察有無腎盂積水與擴大等。
統計處理和結果評價
根據檢查情況，分別計算各組實驗動物的妊娠率、分娩率、死胎率、畸胎出現率、單項畸形出現率、活胎仔平均畸形出現數、母體畸胎出現率等。計算畸胎總數時，1個活胎仔出現1種或1種以上畸形均記為1個畸胎，計算畸形總數時，如1個活胎仔表現出幾種畸形，則應將相應數目記入總數。選用χ檢驗或方差分析對試驗結果進行分析評價。如試驗組的上述指標顯著高於對照組，並有劑量-反應關係，可判定受試物具有致畸作用。
