重組B型肝炎疫苗

重組B型肝炎疫苗是由重組酵母或重組CHO工程細胞表達的B型肝炎表面抗原,經純化、滅活及加入佐劑吸附製成。前者為重組酵母B型肝炎疫苗,後者為重組CHOB型肝炎疫苗。其性狀為白色混懸液,靜置形成可搖散的沉澱。

基本介紹

  • 中文名:重組B型肝炎疫苗
  • 外文名:Recombinant Hepatitis B Vaccine
  • 書頁號:2000年版二部-1114
  • 批准文號:國藥準字S20100002
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基本信息

重組B型肝炎疫苗
拼音名:Chongzu Yixingganyan Yimiao

藥物用法

(1)本疫苗注射時要充分搖勻。
(2)注射部位為上臂三角肌肌內。
(3)新生兒第1針在出生後24小時內注射,1個月及6個月後注射第2、3針;其他人群免疫程式為第0、1、6個月,劑量均為5ug/支。

注意事項

【製法】取國家批准的重組酵母B型肝炎疫苗的原始菌種,經一代擴增,製成生產菌種,逐級擴增後接種於發酵罐,在適宜溫度和時間內進行三級發酵,收集細胞,經破碎,吸附粗提,疏水色譜法精提B型肝炎表面抗原,再經硫氰酸鹽處理,除菌濾過,甲醛滅活,氫氧化鋁吸附等,加入硫柳汞作為防腐劑。
取國家批准的重組CHOB型肝炎疫苗細胞株,用靜置培養或旋轉法培養細胞,當B型肝炎表面抗原的分泌量達到每1.0mg/L時,收穫培養液,經硫酸銨鹽析,2~3次密度梯度離心和色譜法純化後,再經濃縮,除菌濾過,甲醛滅活,氫氧化鋁吸附等,加硫柳汞作為防腐劑,分裝製成。
【鑑別】取本品,照《中國生物製品規程》酶聯免疫吸附法,與已知B型肝炎表面抗體確證其為B型肝炎表面抗原
【檢查】照《中國生物製品規程》規定的方法檢查如下項目。
純度 不得低於98%。
氫氧化鋁 每1ml不得過1mg。
硫柳汞 不得過0.01%。
甲醛 不得過0.01%。
異常毒性 取本品,依法檢查,應符合規定。
熱原 取本品,依法檢查,應符合規定。
無菌 取本品,用直接接種法檢查,應符合規定。
【效價測定】取本品,照《中國生物製品規程》測定,應符合規定。
酵母B型肝炎疫苗的ED50不得過1.5μg。體外相對效力試驗抗原含量與參比苗的抗原比值不低於0.5。
CHOB型肝炎疫苗的ED50與參比苗的ED50比值不低於1.0。
【類別】亞單位疫苗
【規格】酵母B型肝炎疫苗 0.5ml:5μg
CHOB型肝炎疫苗 1ml:10μg
【貯藏與效期】在2~8℃的暗處保存。有效期2年。

疫苗種類

血源B肝疫苗經過十年上億人份人群接種,證明具有良好的安全性的免疫原性,但存在對生產者和獻血者健康有潛在危險性,生產成本高等缺陷,我國已經完成同重組B肝疫苗對血源疫苗的替代工作。
重組B肝疫苗主要分為酵母,(釀酒酵母甲基營養型酵母)以及中國倉鼠卵巢細胞(Chinese Hamster Ovary cell,CHO)表達疫苗。

釀酒酵母

釀酒酵母(Saccharomyces cervisae)
1982年Valenzuela首先在釀酒酵母中成功表達B型肝炎病毒表面抗原(HBsAg),1986年9月美國默克公司的重級酵母B肝疫苗首次取得專利並得到美國FDA的批准。1989年7月比利時史克比成公司的另一重組酵母B肝炎疫苗也取得專利。重組酵母B肝疫苗的生產廠家除默克公司,史克公司外,我國北京天壇生物,深圳康泰公司也大量生產該種疫苗。其優點為:酵母為低等真核微生物,易於在營養成份簡單的培養基中高密中發酵培養,利用工業化生產,表達量高,世界上大規模生產和上市的疫苗大多數由該表達系統製備而成。

甲基營養型酵母

共有4種表達系統。甲基營養型酵母生產HbsAg具有培養基廉價,目的基因與酵母染色整合的優點, 不僅可克服質粒丟失,還可提高表達量。漢遜酵母(Hansenula Polymorpha,H.P.)和畢赤酵母(Pichia Pastoris,P.P.)系統已套用於工業化生產。已上市的釀酒酵母和甲基營養型酵母表達B肝疫苗為含HbsAg成份的疫苗。

國產疫苗

研究證明:國產血源B肝疫苗的保護效果至少維持9-10年,國產重組B肝疫苗(主要為酵母疫苗)的免疫效果和免疫持久性如何,是人們關心的重點。因為B肝病毒缺乏易感動物模型,B肝疫苗的免疫效果考核只能套用人體考核來評價,既往研究證明套用B肝苗阻斷HbsAg、HbeAg雙陽性母親的新一兒傳播HBV是評價B肝疫苗的效力的最直接指標,且1-10歲兒童對B肝疫苗反應較好。我們選擇新生兒和兒童作為疫苗考核對象,進行國產酵母B肝疫苗的免疫效果和持久性研究。階段結果報告如下:

免疫效果

新生兒:
(1) 母嬰傳播阻斷保護率:套用6批國產量5 μg酵母疫苗對163例HbsAg,HbeAg雙陽性母親的新生兒進行母嬰傳播阻礙斷效果考核,結果保護率在81.48-92.07%之間,遠高於文獻報導的10 μg(59.2%)和20 μg(74.3%)血源B肝疫苗,與30 μg血源B肝疫苗的保護率(85.1%)相當,而進口5 μg M苗(46例,)10 μgA苗(58例)和10 μg S酵母疫苗(30例)的保護率分別為90.33%、86.59%和92.58%。表明國產酵母疫苗免疫效果達到國外同類產品和30 μg國產血源B肝疫苗的保護水平。
(2) 抗體GMT:未發現第一針免後3、9、12月時,HbsAg、HbeAg雙陽性孕婦所生新生兒的抗體GMT與HbsAg單陽性及健康孕婦所生新生兒抗體GMT有顯著差異。
小學生:
(1) 抗體陽性率:第一針免後1年時,進口酶母疫苗,國產酵母疫苗和國產CHO疫苗抗體陽性率在第一針免疫後3、9、12月均無顯著差異。
(2) 抗體CMT比較:第一針免後一年時,進口酶母疫苗(10 μg)和國產CHO疫苗(10 μg)抗體GMT峰值較高,國產酵母疫苗(5 μg)較低。

免疫持久性

對套用0、1、6月程式免疫的小學生進行了隨訪觀察。隨訪年及3年時,2批國產酵母疫苗具有保護性抗體(10mIU/ml)的陽轉率分別為81.48%;68.66%和92.11%;74.14%,而進口A和M疫苗分別為90.38%;69.56%和93.10%;78.05%。2批國產酵母疫苗抗體GMT分別為123.99;146.10和92.11;83.52,A和M疫苗分別為120.56;67.07和145.75;74.62。
對套用0、1、2月程式免疫的400名小學生進行了免後4年的隨訪觀察,結果3批國產酵產疫苗陽性率分別為87.50%;77.33%;79.49%,而對照M(5 μg)疫苗為91.89,抗體GMT分別為:65.57;71.40;59.20和74.84。由抗體峰值6月至4年時,3批國產疫苗抗體陰轉率分別為7.2;5.26和13.79%,對照M苗為5.17%。無論抗體陽性一率,抗體GMT以及4年抗體陰轉率,3批國產疫苗和M苗間增無顯著差異。
我們隨該結果表明,2批國產酵母B肝疫苗免後5年時抗體陽性率已降至70%以下,而同期血源B肝抗體陽性率在81-69%之間。
表明:國產酵母重組B肝疫苗的免疫效果達到了進口酵疫苗的免疫水平,但抗體陽性率和抗體GMT下降較快,考慮當前B肝疫苗供應充足,酵母疫苗的加強接種應提到議事日程。

疫苗發展

(一)聯合疫苗:
聯合疫苗具有減少注射針次、接種副反應及提高接種覆蓋率的優點。已上市的聯合疫苗如SB公司的百白破-B肝四聯疫苗、甲-B肝聯合疫苗,MSD公司的流感嗜血桿菌B型肝炎偶聯疫苗等。我國全細胞百白破-B肝四聯疫苗和無細胞百白破-B肝四聯疫苗已完成臨床前研究,甲-B肝聯合疫苗的開發研究制也在進行。
1) 現有疫苗增加前S基因或替換現有鋁佐劑
研究開發植物來源、細胞因子、人工合成和可生物降解的高分子聚合物等佐劑,目的在於提高細胞免疫效果,國外已有製品進行臨床研究。
2) DNA疫苗:可以肌肉細胞內表達B肝表面抗菌原,誘導細胞免疫應答,同時具有長期表達抗原,可減少加強免疫及成本低,儲存方便的特點。
3) 增大劑量酵母疫苗(10 μg/支)的生產:
我國現階段生產和使用的酵母B肝疫苗均為5 μg/支,由於以下原因:①、實際套用反映5 μg酵母疫苗的抗體陽性率和滴度較低。②、我們對接種5 μg疫苗的120例成人進行檢測,發現免後抗體陽性率和滴度較低,第二針免後1個月時抗體陽性率為70.00%,抗體GMT為9.83;完成全程免疫後1個月時抗體陽性率為80.77%,抗體GMT為151.46。③、MSD疫苗成人劑量為10 μg/支。目前國內正進行10 μg疫苗的臨床考核。此外還應結合臨床(血透析,腎臟移植等)和實際需要,生產不同劑量的B肝疫苗
(三)對現有疫苗生產線的生產能力進一步開發,以及研製高表達量的新一代重組B肝疫苗,以降低成本,提高疫苗的覆蓋率。
(四)加強疫苗保護機制和免疫持久性的研究。

注意事項

所有的孕婦在早期產前檢查時應常規檢測B型肝炎表面抗原(HBsAg)。B型肝炎表面抗原陽性的孕婦應在妊娠後期再查B型肝炎e抗原(HBeAg)。如果B型肝炎表面抗原為陽性,在分娩前就要準備好B肝疫苗。同時要問清楚嬰兒出生後能否在24小時內進行疫苗注射,第2針和第3針在什麼地方注射等問題。
B型肝炎表面抗原(HBsAg)和B型肝炎e抗原(HBeAg)雙陽性母親的嬰兒,如無異常,應在出生後6—12小時內肌內注射1支高效價B肝免疫球蛋白,生後1個月再注射1支高效價B肝免疫球蛋白(≥100單位/毫升)。2、3、6月齡時各注射1支20微克的B肝疫苗
B型肝炎表面抗原(HBsAg)陽性而B型肝炎e抗原(HBeAg)陰性母親所生新生兒,應在0(出生後24小時內)、1、6個月齡分別以10微克、10微克、10微克的劑量接種B肝疫苗。在不具備檢查B型肝炎e抗原(HBeAg)條件的地區,對B型肝炎表面抗原(HBsAg)陽性母親的新生兒,均應按雙陽性者接種疫苗。
不具備檢查B型肝炎表面抗原(HBsAg)條件的地區,應對所有新生兒在0、1、6月齡分別以10微克、10微克、10微克的劑量接種疫苗。

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