基本介紹
- 中文名：薄層色譜儀
- 外文名：Thin layer chromatograph
- 又稱：薄板層析
- 隸屬：色譜法
- 掃描速度：0~120mm/s
- 波長範圍：190nm~900nm （連續可調）
- 波長精確度：±0.5nm
簡介,色譜法,儀器材料,操作方法,掃瞄器,後測定法,
簡介
薄層色譜又叫薄板層析，是色譜法中的一種，是快速分離和定性分析少量物質的一種很重要的實驗技術，屬固—液吸附色譜，它兼備了柱色譜和紙色譜的優點，一方面適用於少量樣品（幾到幾微克，甚至0.01微克）的分離；另一方面在製作薄層板時，把吸附層加厚加大，因此，又可用來精製樣品，此法特別適用於揮發性較小或較高溫度易發生變化而不能用氣相色譜分析的質。此外，薄層色譜法還可用來跟蹤有機反應及進行柱色譜之前的一種“預試”。
薄層色譜(Thin Layer Chromatography)常用TLC表示，又稱薄層層析，屬於固－液吸附色譜。是近年來發展起來的一種微量、快速而簡單的色譜法，它兼備了柱色譜和紙色譜的優點。一方面適用於小量樣品（幾到幾十微克，甚至0.01μg）的分離；另一方面若在製作薄層板時，把吸附層加厚，將樣品點成一條線，則可分離多達500mg的樣品。因此又可用來精製樣品。故此法特別適用於揮發性較小或在較高溫度易發生變化而不能用氣相色譜分析的物資。此外，在進行化學反應時，常利用薄層色譜觀察原料斑點的逐步消失來判斷反應是否完成。
薄層色譜是在被洗滌乾淨的玻板（10×3cm左右）上均勻的塗一層吸附劑或支持劑，帶乾燥、活化後將樣品溶液用管口平整的毛細管滴加於離薄層板一端約1cm處的起點線上，涼乾或吹乾後置薄層板於盛有展開劑的展開槽內，浸入深度為0.5cm。待展開劑前沿離頂端約1cm附近時，將色譜板取出，乾燥後噴以顯色劑，或在紫外燈下顯色。
色譜法
薄層色譜法，是將適宜的固定相塗布於玻璃板、塑膠或鋁基片上，成一均勻薄層。待點樣、展開後，與適宜的對照物按同法所得的色譜圖作對比，用以進行藥品的鑑別、雜質檢查或含量測定的方法。
儀器材料
(1) 玻板 除另有規定外，用5cm×20cm，10cm×20cm或20cm×20cm的規格,要求光
滑、平整，洗淨後不附水珠，晾乾。
(2)固定相或載體 最常用的有矽膠G、矽膠GF 、矽膠H、 矽膠HF,
其顆粒大小,一般要求直徑為10～40μm。薄層塗布,一般可分無黏合劑和含黏合劑兩種;
前者系將固定相直接塗布於玻板上, 後者系在固定相中加入一定量的黏合劑，一般常用
10%～15%煅石膏(CaSO4.2H2O在140℃加熱4小時)，混勻後加水適量使用，或用羧甲基
纖維素鈉水溶液(0.5%～0.7%)適量調成糊狀，均勻塗布於玻板上。也有含一定固定相
或緩衝液的薄層。
(3) 塗布器 應能使固定相或載體在玻板上塗成一層符合厚度要求的均勻薄層。
(4) 點樣器 同紙色譜法項下。
(5)展開室 應使用適合薄層板大小的玻璃制薄層色譜展開缸，並有嚴密的蓋子，
除另有規定外，底部應平整光滑，應便於觀察。
操作方法
(1) 薄層板製備 除另有規定外,將1份固定相和3份水在研缽中向一方向研磨混合,
去除表面的氣泡後，倒入塗布器中,在玻板上平穩地移動塗布器進行塗布（厚度為0.2～
0.3mm），取下塗好薄層的玻板，置水平台上於室溫下晾乾，後在110℃烘30分鐘，即置
有乾燥劑的乾燥箱中備用。使用前檢查其均勻度（可通過透射光和反射光檢視）。
(2) 點樣 除另有規定外，用點樣器點樣於薄層板上，一般為圓點，點樣基線距底
邊2.0cm，樣點直徑及點間距離同紙色譜法,點間距離可視斑點擴散情況以不影響檢出為
宜。點樣時必須注意勿損傷薄層表面。
(3) 展開 展開缸如需預先用展開劑飽和，可在缸中加入足夠量的展開劑，並在壁
上貼二條與缸一樣高、寬的濾紙條，一端浸入展開劑中，密封缸頂的蓋，使系統平衡或
按正文規定操作。
將點好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中,浸入展開劑的深度為距薄層板底邊0.5
～1.0cm（切勿將樣點浸入展開劑中）,密封缸蓋,待展開至規定距離(一般為10～15cm),
取出薄層板，晾乾，按各品種項下的規定檢測。
(4) 如需用薄層掃瞄器對色譜斑點作掃描檢出，或直接在薄層上對色譜斑點作掃描
定量，則可用薄層掃描法。
薄層掃描的方法，除另有規定外，可根據各種薄層掃瞄器的結構特點及使用說明，
結合具體情況，選擇吸收法或螢光法，用雙波長或單波長掃描。由於影響薄層掃描結果
的因素很多，故應在保證供試品的斑點在一定濃度範圍內呈線性的情況下，將供試品與
對照品在同一塊薄層上展開後掃描，進行比較並計算定量，以減少誤差。各種供試品，
只有得到分離度和重現性好的薄層色譜，才能獲得滿意的結果。
掃瞄器
用表面塗有吸附劑的石英棒（直徑0、9mm；長200mm）代替薄層板，點樣於棒一端，按一般方法展開，以氫焰檢測器為檢測單元，棒放於儀器內，點火，以一定速度掃描。
後測定法
薄層經展開後用刮刀或捕集器將斑點的吸附劑捕集後，再用適當有機溶劑洗脫，然後用可見、紫外分光光度法、螢光分光光度法測定含量。
但樣品斑點不能噴顯色劑，以免影響測定，斑點位置的確定方法。
樣品在紫外線下發射螢光的，可在紫外燈下觀察斑點並用針划去斑點位置。
用碘蒸汽顯色，在組分處理出棕色斑點（碘吸附後會揮發）。
用標準物對照，將標準點於邊上一測顯色時，蓋住樣品，定出斑點位置。
