薄層色譜是在被洗滌乾淨的玻板（10×3cm左右）上均勻的塗一層吸附劑或支持劑，待乾燥、活化後將樣品溶液用管口平整的毛細管滴加於離薄層板一端約1cm處的起點線上，晾乾或吹乾後置薄層板於盛有展開劑的展開槽內，浸入深度為0.5cm。待展開劑前沿離頂端約1cm附近時，將色譜板取出，乾燥後噴以顯色劑，或在紫外燈下顯色。
基本介紹
- 中文名：薄層色譜
- 外文名：(Thin Layer Chromatography)
- 別名：薄板層析
- 類別屬性：快速分離少量物質的實驗技術
原理,實驗流程,注意事項,趨勢,膠板,
原理
基本原理
色譜法的基本原理是利用混合物中各組分在某一物質中的吸附或溶解性能的不同，或和其它親和作用性能的差異，使混合物的溶液流經該種物質，進行反覆的吸附或分配等作用，從而將各組份分開。薄層色譜是一種微量、快速和簡便的色譜方法。由於各種化合物的極性不同，吸附能力不相同，在展開劑上移動，進行不同程度的解析，根據原點至主斑點中心及展開劑前沿的距離，計算比移值（Rf）：
化合物的吸附能力與它們的極性成正比，具有較大極性的化合物吸附較強，因此Rf值較小。在給定的條件下（吸附劑、展開劑、板層厚度等），化合物移動的距離和展開劑移動的距離之比是一定的，即Rf值是化合物的物理常數，其大小隻與化合物本身的結構有關，因此可以根據Rf值鑑別化合物。
薄層色譜可適用小量樣品（幾到幾十微克甚至0.01μg）的分離：也可用於多達500mg樣品的分離，是近代有機化學中用於定性，定量的一種重要手段。特別適用於那些揮發性小的化合物，以及在高溫下易發生化學變化而不能用氣相色譜分析的物質。
實驗流程
鋪板 點樣 展開 顯色 計算Rf值
鋪板 取7.5x2.5cm左右的載玻片5片，洗淨晾乾。在50mL燒杯中，放置3g矽膠G，逐漸加入0.5﹪羧甲基纖維素鈉水溶液(CMC)8mL，調成均勻的糊狀，塗於上述潔淨的載玻片上，用手將帶漿的玻片在水平的桌面上做上下輕微的顛動，製成薄厚均勻、表面光潔平整的薄層板，塗好的矽膠G的薄層板置於水平的玻璃板上，在室溫放置0.5h後，放入烘箱中，緩慢升溫至110℃，恆溫0.5h後取出，稍冷後置於乾燥器中備用。
點樣點樣用的毛細管為內徑<lmm的管口平整的毛細管，將樣品溶於低沸點的溶劑（乙醚、丙酮、乙醇、四氫呋喃等）配成溶液。點樣前，可先用鉛筆在小板上距一端5mm處輕輕劃一橫線，作為起始線，然後用毛細管吸取樣品在起始線上小心點樣，如需重複點樣，則應待前次點樣的溶劑揮發後方可重點。若在同一塊板上點幾個樣，樣品點間距離為5mm以上。
展開劑的選擇主要根據樣品的極性、溶解度和吸附劑的活性等因素來考慮。薄層的展開在密閉的容器中進行。先將選擇的展開劑放入廣口瓶中，使廣口瓶內空氣飽和5－10min，再將點好試樣的薄層板放入廣口瓶中進行展開，點樣的位置必須在展開劑液面之上，當展開劑上升到薄層的前沿（離前端5~10mm）或多組分已明顯分開時，取出薄層板放平晾乾，用鉛筆劃溶劑前沿的位置後，即可顯色。
顯色如果化合物本身有顏色，就可直接觀察它的斑點。如果本身無色，可先在紫外燈光下觀察有無螢光斑點（有苯環的物質都有），用鉛筆在薄層板上劃出斑點的位置；對於在紫外燈光下不顯色的，可放在含少量碘蒸氣的容器中顯色來檢查色點（因為許多化合物都能和碘成黃棕色斑點），顯色後，立即用鉛筆標出斑點的位置。
計算Rf值準確地找出原點，溶劑前沿以及樣品展開後斑點的中心，分別測量溶劑前沿和樣點在薄層板上移動的距離，求出其Rf值。
注意事項
1、因為是乾板，鋪板時手要平穩，否則容易不均勻。
2、點樣時幾個樣點要在一條直線上，大小要合適(斑點直徑一般不超過2mm)，間距5~6mm。
3、點樣用的毛細管不能交叉使用。
4、因溶液太稀，一次點樣如果不夠需重複點樣，則應待前次點樣的溶劑揮發後方可重點，以防樣點過大，造成拖尾、擴散等現象，影響分離效果。
5、點樣結束待樣點乾燥後，方可進行展開。點樣要輕，不可刺破薄層。
6﹑放板時手要平穩，否則走出斜線。
製備薄層板所需的儀器與試劑
注意要點:
1)室內溫度,尤其不能太潮濕
2)矽膠和水的比例要合適:2.5-4.5最佳.根據自己點樣的粘稠度調節
3)研磨,均勻,耐心,不要怕花時間
4)活化,注意在活化過程中不要受干擾
5)研磨要細、調和均勻，鋪板要注意避免氣泡、厚薄均勻。
趨勢
現代薄層色譜基本都是由各種儀器來代替，以消除在實驗過程中的諸多影響因素。這也是國內科技發展的大趨勢，逐漸取代人為因素在實驗過程中的影響，從而達到重現性的效果。
在套用方面也是多種多樣，在製藥、食品、保健品、化妝品、法檢、飼料、工業等方面均有較廣泛的套用。
膠板
手工鋪制層析板耗費時間較長，為方便使用，可以直接從市場上獲取標準的層析板。
商用層析板一般會標註G、H、GF、HF；其中G表示凝固劑，H則不含凝固劑，G的價格通常低於H；F則代表螢光
目前國內的商用層析板質量與國外仍有較大差距，不推薦使用國產商用層析板（矽膠粒徑較大，均勻度不夠高）。
矽膠H：純矽膠
矽膠GF：254螢光和粘合劑
