紅細胞裂解液

紅細胞裂解液（Red Blood Cell Lysis Buffer,或稱 ACK Lysis Buffer）是一種去除紅細胞最簡便易行的方法，即用裂解液裂解紅細胞，它既不損傷有核細胞又能充分的去除紅細胞。裂解液裂解是一種比較溫和的紅細胞去除方法，主要用於經酶消化分散的組織細胞的分離純化，淋巴細胞的分離純化以及組織細胞蛋白與核酸提取等實驗中紅細胞的去除。經紅細胞裂解液裂解得到的組織細胞中不含紅細胞，可進一步用於原代培養、細胞融合、流式細胞分析、核酸與蛋白的分離和提取等。

基本介紹

• 中文名：紅細胞裂解液
• 外文名：Red Blood Cell Lysis Buffer
• 類型：去除紅細胞最簡便易行的方法
• 用途：經酶消化分散組織細胞的分離純化

保存條件

2-8℃保存。

配方

ACK lysis buffer

Reagent	Quantity (for 1000 mL)	Final concentration
NH4Cl	8.02 g	150 mm
KHCO3	1 g	10 mm
Na2EDTA	37.2 mg	0.1 mm
Dissolve all reagents in 850 mL of H2O. Adjust the pH to 7.2–7.4, and add H2O to 1000 mL. Store for up to 6 mo at room temperature.

使用說明

組織細胞樣品：

1.新鮮組織經胰酶或膠原酶等消化分散成單個細胞懸液，離心棄去上清液；

2.從4℃冰櫃中取出ELS裂解液，按1:3-5的比例向細胞沉澱中加入ELS裂解液（1ml細胞壓積加入3-5ml裂解液），輕輕吹打混勻；

3.800-1000rpm離心5-8分鐘，離心棄去上層紅色清液；

4.收集沉澱部分，加入Hank’s液或無血清培養液離心洗2-3次；

5.如裂解不完全可重複步驟2和3；

6.重懸細胞，用於後續實驗；如提取RNA，最好是於步驟4開始使用DEPC水配製的溶液中進行。

血細胞：

1.新鮮抗凝血，離心棄去上清液；

2.取出4℃冰櫃預冷的ELS裂解液，按1:6-10的比例向細胞沉澱中加入ELS裂解液（1ml細胞壓積加入6-10ml裂解液），輕輕吹打混勻；

3.800-1000rpm離心5-8分鐘，離心棄去上層紅色清液；

4.收集沉澱部分，加入Hank’s液或無血清培養液離心洗2-3次；

5.如裂解不完全可重複步驟2和3；

6.重懸細胞，用於後續實驗；如提取RNA，最好是於步驟4開始使用DEPC水配製的溶液進行。

作用原理

氯化銨是紅細胞裂解液的主要效應物質，氨根離子不能通過細胞膜，而其他離子可以通過，造成細胞內外的離子濃度差異，形成了滲透壓差，外部的水分會擴散至細胞內，使紅細胞膨脹，達到裂解的效果。