《精編免疫學實驗指南》是2009年科學出版社出版的圖書，作者是(美國)J.E.科學根、 (美國)D.H.馬古利斯等。
基本介紹
- 書名：精編免疫學實驗指南
- 作者：(美國)J.E.科學根 (美國)D.H.馬古利斯等
- ISBN：9787030219978
- 定價：158.00元
- 出版社：科學出版社
- 出版時間：2009年
- 開本：16開
內容簡介,編輯推薦,目錄,
內容簡介
《精編免疫學實驗指南》是國際權威的生命科學實驗方法學叢書之《現代免疫學方法》的精華版，共15章。分別介紹了多克隆抗體和單克隆抗體的製備、純化和鑑定，人和小鼠T細胞、B細胞、NK細胞、樹突細胞、巨噬細胞等及其亞群的分離、鑑定和各種功能分析，T細胞、B細胞克隆和T細胞雜交瘤的構建，細胞因子及其受體和分泌細胞因子細胞的檢測，免疫細胞活化的信號分子分析，用分子生物學方法製備Fv、構建噬菌體抗體庫和研究TCR等免疫分子等。還介紹了構建自身免疫病、炎症性疾病和感染性疾病等的動物模型的方法。
編輯推薦
《精編免疫學實驗指南》內容涵蓋目前免疫學常用實驗技術的基本原理、標準方案和最新進展，具有簡明規範、步驟清晰、可行性強等特點。
《精編免疫學實驗指南》可供免疫學、醫學基礎研究工作者以及臨床實驗工作者參考使用。
目錄
前言
第一章免疫應答導論
單元1.1酶聯免疫吸附試驗
基本方案間接ELISA法檢測特異性抗體
備選方案1直接競爭ELISA法檢測可溶性抗原
備選方案2抗體夾心ELISA法檢測可溶性抗原
備選方案3雙抗體夾心ELISA法檢測特異性抗體
備選方案4夾心ELISA法檢測同種型
備選方案5直接細胞ELISA法檢測細胞表面抗原
備選方案6間接細胞ELISA法檢測抗細胞表面抗原的特異性抗體
輔助方案十字交叉連續稀釋分析法（criss-crossserial-dilutionanalysis）測定試劑最適濃度
單元1.2多克隆抗血清的製備
基本方案使用弗氏佐劑製備多克隆抗體的免疫接種法
備選方案使用其他佐劑製備多克隆抗體的免疫接種法
輔助方案從血液中製備血清
單元1.3單克隆抗體的製備
基本方案1單克隆抗體製備中的免疫接種
基本方案2細胞融合與雜交瘤分選
輔助方案1雜交瘤培養上清的篩選分析
輔助方案2雜交瘤的建系
輔助方案3有限稀釋克隆法
輔助方案4克隆和擴增用培養基的製備
單元1.4單克隆抗體培養上清與腹水的製備
基本方案1單克隆細胞培養上清的製備
備選方案1單克隆細胞培養上清的大規模製備
備選方案2雜交瘤或細胞系細胞的大規模製備
基本方案2含有單克隆抗體的腹水製備
單元1.5免疫球蛋白G（IgG）的純化
基本方案1硫酸銨沉澱和凝膠過濾層析
基本方案2蛋白A交聯瓊脂糖凝膠親和層析
備選方案1蛋白G交聯瓊脂糖凝膠親和層析
備選方案2抗大鼠κ鏈單克隆抗體交聯瓊脂糖凝膠親和層析
單元1.6免疫球蛋白G（IgG）片段的水解
基本方案1木瓜蛋白酶水解IgG成Fab片段摸索性試驗
基本方案2木瓜蛋白酶水解IgG獲取Fab片段的大量製備
基本方案3胃蛋白酶水解IgG成F（ab′）2片段的摸索性試驗
基本方案4胃蛋白酶水解IgG獲取F（ab′）2片段的大量製備
備選方案用預先活化的木瓜蛋白酶水解IgG製備F（ab）2
單元1.7免疫球蛋白M（IgM）和免疫球蛋白D（IgD）的純化
基本方案1用透析和凝膠過濾層析法純化IgM
備選方案1硫酸銨沉澱法純化IgM
備選方案2甘露聚糖結合蛋白親和純化IgM
備選方案3IgM純化試劑盒
基本方案2凝集素親和層析法純化小鼠IgD
單元1.8抗體可變區（V區）的克隆、表達和修飾
基本方案1通過使用冗餘引物克隆和表達免疫球蛋白可變區
輔助方案TA載體的製備
基本方案2用ELISA法鑑定轉染細胞分泌的抗體分子
基本方案3轉染細胞分泌抗體分子的鑑定
單元1.9核酸免疫
基本方案1小鼠注射接種DNA
基本方案2小鼠基因槍接種DNA
輔助方案1包裹DNA的金粉顆粒的製備
輔助方案2製備包裹有DNA的金粉顆粒的樣品管
輔助方案3基因槍接種中氦氣壓力和顆粒大小的最最佳化
第二章小鼠淋巴細胞功能的體內體外分析
單元2.1小鼠單個核細胞的分離
基本方案從脾臟、胸腺和淋巴結製備細胞懸液
輔助方案1去除脾臟細胞懸液中的紅細胞
輔助方案2一步梯度法去除死細胞
單元2.2磁珠法分離T細胞和B細胞
基本方案1用AUTOMACS系統進行總T細胞、CD4+細胞或CD8+T細胞的自動分離
基本方案2使用AUTOMACS系統進行B細胞的自動分選
基本方案3使用AUTOMACS系統進行輔助細胞的自動分選
備選方案1用磁性分選柱手工操作分離淋巴細胞
基本方案4用AUTOMACS系統自動分選CD4+CD25+抑制性細胞
備選方案2用磁性分選柱手工操作分離CD4+CD25+抑制性細胞
單元2.3樹突細胞的分離
基本方案1塑膠黏附和EA玫瑰花結富集DC
輔助方案膠原酶消化製備脾臟細胞懸液
基本方案2用小鼠骨髓前體細胞培養樹突細胞（DC）
單元2.4從小鼠脾臟分離小鼠天然殺傷細胞
基本方案
單元2.5B細胞功能的檢測
基本方案1抗原特異性的抗體產生
基本方案2Jerne-NordinPFC測定法
基本方案3Cunningham-SzenbergPFC測定法
備選方案1改良Jerne-NordinPFC測定法用於型特異性反應
備選方案2改良Jerne-NordinPFC測定法用於測定多克隆抗體反應
輔助方案1製備瓊脂糖包被的玻片
輔助方案2製備Cunningham-Szenberg小室
輔助方案3三硝基苯半抗原（TNP）偶聯SRBC
輔助方案4蛋白質A偶聯SRBC
輔助方案5製備TNP-卵白蛋白
輔助方案6用Percoll梯度離心純化靜息B細胞
單元2.6B淋巴細胞活化的早期事件
基本方案1BCR誘導的B細胞內鈣變化
基本方案2蛋白質酪氨酸磷酸化的分析
基本方案3細胞大小與B細胞活化分子表達的分析
單元2.7B細胞功能的增殖檢測方法
基本方案抗IgM與LPS刺激的B細胞增殖
備選方案1用8-巰基喹啉（8-MG）刺激B細胞多克隆活化
備選方案2用蛋白激酶C激活劑及鈣離子載體刺激B細胞多克隆活化
備選方案3硫酸葡聚糖與poly（I∶C）刺激B細胞多克隆活化
備選方案4細胞數量增加的定量
單元2.8BrdU檢測T細胞和B細胞增殖
基本方案
單元2.9採用細胞內螢光染料CFSE檢測淋巴細胞的遷移和增殖
基本方案淋巴細胞的CFSE標記
輔助方案流式細胞儀分析CFSE標記的細胞
單元2.10細胞毒性T淋巴細胞的誘導及檢測
基本方案1從CTL前體中誘導細胞毒性
基本方案2鉻釋放法分析CTL活性
輔助方案1次要組織相容性抗原的小鼠體內應答
輔助方案2病毒抗原體內免疫小鼠
輔助方案3TNP修飾靶/刺激細胞
輔助方案4病毒感染靶/刺激細胞
備選方案1多克隆CTL活性的誘導
備選方案2CTL再定向殺傷活性的檢測
單元2.11T淋巴細胞增殖實驗
基本方案1未致敏T淋巴細胞的活化
備選方案1用抗體激活未致敏的T細胞
備選方案2混合淋巴細胞增殖實驗
輔助方案1從抗原呈遞細胞或刺激細胞懸液中剔除T淋巴細胞
輔助方案2輔助/刺激細胞的滅活
基本方案2致敏T細胞的活化
基本方案3CD4+CD25+T細胞的活化和抑制功能的檢測
備選方案3CD4+CD25+T細胞抑制功能的兩步法檢測：短期活化和擴增CD4+CD25+T細胞並分析其抑制功能
單元2.12T細胞克隆的建立
基本方案1產生和維持同種反應性Th和CTL克隆
基本方案2用可溶性蛋白抗原誘導Th克隆
輔助方案1製備刀豆蛋白A活化的上清（ConA上清）
輔助方案2製備混合淋巴細胞培養上清（MLC上清）
輔助方案3製備PMA激活的EL-4淋巴瘤細胞上清（EL-4上清）
輔助方案4用顯微操作的方法克隆
單元2.13製備小鼠T細胞雜交瘤
基本方案細胞融合和T細胞雜交瘤的選擇
輔助方案1篩選表達CD3-TCR原始雜交瘤
輔助方案2篩選抗原特異性的雜交瘤
單元2.14檢測凋亡和其他形式的細胞死亡
基本方案1用活細胞或螢光染料定量細胞活性
基本方案2DNA裂解片段的定量
備選方案計數放射性標記的DNA定量細胞中DNA片段
輔助方案1用125IUdR和51Cr放射性標記細胞核
輔助方案2用3HTdR放射性標記細胞核
第三章細胞活化的生物化學
單元3.1淋巴細胞活化過程中肌醇磷脂周轉的分析
基本方案1通過道威克斯（DOWEX）離子交換層析分析[3H]肌醇磷酸
備選方案通過HPLC方法分析[3H]肌醇磷酸
基本方案2通過薄層層析方法分析肌醇磷脂
單元3.2抗磷酸化酪氨酸的印跡檢測
基本方案抗磷酸化酪氨酸印跡檢測的準備及分析
備選方案使用125I標記蛋白A進行檢測
單元3.3免疫複合物方法檢測酪氨酸蛋白激酶
基本方案酪氨酸蛋白激酶的免疫沉澱和自身磷酸化檢測
備選方案1蛋白激酶對外源底物的磷酸化檢測
備選方案2蛋白激酶對外源底物的磷酸化檢測
單元3.4識別特異性酪氨酸磷酸化多肽抗體的製備
基本方案1多克隆抗磷酸肽抗體的製備
基本方案2製備抗磷酸肽的單克隆抗體
輔助方案1肽的合成
輔助方案2肽段偶聯到Affi-Gel10親和性基質
輔助方案3磷酸酪氨酸偶聯到Affi-Gel10親和基質
單元3.5T細胞中絲裂原活化的蛋白激酶（MAPK）活性分析
基本方案1免疫複合物蛋白激酶測定
基本方案2固相蛋白激酶法檢測JNK活性
基本方案3SDS-PAGE後原位檢測JNK蛋白激酶活性[“膠內”（IN-GEL）激酶測定]
基本方案4利用磷酸化位點特異性抗體檢測MAPK的活化
輔助方案製備GST-MAPK底物融合蛋白
單元3.6脂筏的分離和套用
基本方案通過蔗糖梯度浮選法製備去污劑抗性的膜並通過免疫印跡對蛋白質進行分析
備選方案用離心法製備去污劑抗性的膜
輔助方案1脈衝追蹤方法分析去污劑抗性的膜蛋白
輔助方案2通過放射性標記檢測去污劑抗性的膜蛋白的全部組分
輔助方案3定量高效薄層色譜法（HP-TLC）進行DRM脂質分析
輔助方案4DEAE葡聚糖凝膠的製備
輔助方案5C18反相色譜柱的製備
輔助方案6用甲基-β-環式糊精去除膽固醇來破壞脂筏
輔助方案7甲基-β-環式糊精（MBCD）處理去除膽固醇的動力學測定
輔助方案8使用MBCD-膽固醇複合物進行細胞膽固醇去除
第四章免疫螢光和細胞分離
單元4.1細胞製備和試劑
基本方案1單細胞表面抗原的免疫螢光標記
基本方案2固定和滲透單細胞的細胞內抗原的免疫螢光標記
輔助方案1用異硫氰酸螢光黃（FITC）偶聯抗體
輔助方案2長臂生物素偶聯抗體
備選方案1未固定細胞胞內抗原的免疫螢光檢測
備選方案2用7-氨基放線菌素D（7-AAD）標記死細胞
單元4.2流式細胞儀分析技術-BD公司出品的流式細胞儀
基本方案FITC偶聯抗體的單色分析
輔助方案1用校準微球和FACSComp軟體進行儀器檢測
輔助方案2單色分析區分活細胞和死細胞
備選方案1FITC和PE偶聯抗體的雙色分析
輔助方案3雙色分析區分活細胞和死細胞
備選方案2三色分析
備選方案3四色分析
第五章細胞因子及其受體
單元5.1IL-2和IL-4的檢測
基本方案採用CTLL-2細胞檢測小鼠IL-2和IL-4
備選方案1採用CTLL-2細胞檢測人IL-2
備選方案2採用CT.4S細胞檢測小鼠IL-4
備選方案3採用CT.h4S細胞檢測人IL-4
輔助方案1白細胞介素或T細胞生長因子（TCGF）單位的計算
輔助方案2小鼠CTLL-2細胞的維持
輔助方案3小鼠CT.4S細胞的維持
輔助方案4小鼠CT.h4S細胞的維持
單元5.2IL-10的檢測
基本方案
單元5.3IL-12的檢測
基本方案人和小鼠IL-12p75異二聚體的ELISA檢測方法
備選方案人和小鼠IL-12p40亞基的ELISA檢測
單元5.4IL-13的檢測
基本方案
單元5.5IL-15的檢測
基本方案
單元5.6IL-18的檢測
基本方案
單元5.7γ干擾素的檢測
基本方案
單元5.8流式細胞儀檢測細胞內因子
基本方案細胞內因子的螢光標記
輔助方案1PMA和ionomycin激活T細胞
輔助方案2抗原活化T細胞
輔助方案3固定和凍存PBMC
輔助方案4PBMC的細胞表面標記
輔助方案5用螢光標記的抗細胞因子抗體標記活化細胞內的細胞因子
單元5.9流式細胞儀檢測細胞因子受體
基本方案用抗受體單克隆抗體檢測人和小鼠的細胞因子受體
備選方案1用標記的細胞因子檢測細胞因子受體
備選方案2多參數分析檢測淋巴細胞亞群細胞因子受體的表達
輔助方案1單克隆抗體和細胞因子的滴定
輔助方案2評價檢測試劑
單元5.10用流式細胞儀檢測細胞因子的分泌和分離分泌細胞因子的細胞
基本方案細胞因子分泌實驗
備選方案1PBMC分泌細胞因子的快速檢測
備選方案2全血細胞分泌細胞因子的快速檢測
單元5.11ELISPOT方法檢測分泌細胞因子的細胞
基本方案
單元5.12α-、β-和γ-干擾素誘導的抗病毒活性的檢測
基本方案小鼠干擾素誘導的抗病毒活性的檢測
輔助方案1病毒培養體系的建立
輔助方案2抗體中和實驗
備選方案人干擾素誘導的抗病毒活性的檢測
單元5.13趨化因子超家族的生物學反應
基本方案1微型趨化實驗檢測趨化因子對粒細胞的趨化
備選方案1微型趨化實驗檢測趨化因子對單核細胞的趨化
備選方案2微型趨化實驗檢測趨化因子對淋巴細胞的趨化
輔助方案細胞外基質蛋白包被聚碳酸酯膜
基本方案2趨化因子誘導的淋巴細胞內游離鈣離子的檢測
第六章天然免疫
單元6.1小鼠巨噬細胞的分離
基本方案1小鼠腹腔巨噬細胞的分離
基本方案2小鼠骨髓巨噬細胞的分離和培養
單元6.2小鼠巨噬細胞的表型檢測
基本方案直標法檢測小鼠巨噬細胞的表型
備選方案間標法檢測小鼠巨噬細胞的表型
單元6.3人單核/巨噬細胞的表型檢測
基本方案
單元6.4小鼠巨噬細胞的活化
基本方案小鼠巨噬細胞的活化
輔助方案炎性小鼠巨噬細胞的活化
單元6.5巨噬細胞一氧化氮的檢測
基本方案
單元6.6巨噬細胞吞噬功能和殺傷功能的檢測
基本方案1巨噬細胞吞噬功能的檢測
輔助方案利用FITC區分胞外黏附和胞內吞噬的細菌
基本方案2巨噬細胞殺傷功能的檢測
輔助方案單核細胞增多性利斯特氏菌的製備
單元6.7巨噬細胞抗腫瘤活性的檢測
基本方案[111In]釋放法檢測巨噬細胞對腫瘤細胞的殺傷作用
輔助方案[111In]標記腫瘤靶細胞
單元6.8Fcγ受體介導的黏附作用和吞噬作用的檢測
基本方案Fcγ受體介導的吞噬作用
輔助方案FcγR介導的黏附作用
單元6.9干擾素介導的抗腫瘤作用
基本方案
單元6.10人NKT細胞的分離和擴增
基本方案1NKT細胞的鑑定
基本方案2免疫磁珠法分離NKT細胞及後續擴增
備選方案1NKT細胞的流式分選及擴增
備選方案2NKT細胞的克隆
輔助方案NKT細胞的二次刺激和克隆
第七章抗原加工處理和呈遞
單元7.1抗原呈遞細胞的選擇和製備
基本方案通過利斯特氏菌刺激製備腹腔巨噬細胞
備選方案1連續注射利斯特氏菌和蛋白腖後製備腹腔巨噬細胞
輔助方案1小鼠腹腔注射用利斯特氏菌的製備
備選方案2ConA刺激的腹腔巨噬細胞的製備
備選方案3骨髓來源的巨噬細胞的製備
輔助方案2製備L929條件培養基
備選方案4製備LPS刺激的B細胞
單元7.2外源性抗原向T細胞的呈遞
基本方案一種抗原加工處理和呈遞的檢測體系
備選方案1用固定後的貼壁型抗原呈遞細胞檢測加工處理過的抗原肽
備選方案2用固定後的非貼壁型抗原呈遞細胞檢測加工處理過的抗原肽
備選方案3蛋白抗原致敏的細胞固定後檢測抗原加工和處理
第八章人類免疫學研究
單元8.1外周血和臍帶血中分離單個核細胞
基本方案Ficoll-Hypaque梯度離心法分離單個核細胞
輔助方案貼壁法去除單個核細胞中的單核細胞和巨噬細胞
單元8.2T細胞亞群的分離純化
基本方案間接淘洗法分離T細胞亞群
備選方案抗體依賴補體介導的細胞毒作用分離T細胞亞群
輔助方案1套用神經氨酸酶處理的綿羊紅細胞玫瑰花環形成法分離T細胞
輔助方案2套用AET處理的綿羊紅細胞玫瑰花環形成法分離T細胞
單元8.3免疫磁珠法純化T細胞
基本方案
單元8.4免疫磁珠法分離B細胞亞群
基本方案
單元8.5單核細胞/巨噬細胞的分離
基本方案1貼壁法分離單核細胞
基本方案2根據大小沉降作用分離單核細胞
基本方案3對流離心洗淘法分離單核細胞
單元8.6人自然殺傷細胞的分離
基本方案從PBMC分離人NK細胞
輔助方案陰性選擇分離NK細胞的單克隆抗體的滴定
單元8.7流式細胞儀檢測全血的人淋巴細胞
基本方案
單元8.8淋巴細胞增殖實驗
基本方案絲裂原誘導的外周血單個核細胞增殖實驗
備選方案1單向混合淋巴細胞反應
備選方案2抗原誘導的T細胞增殖實驗
輔助方案3HTdR摻入和細胞收集
單元8.9B細胞分泌抗體的檢測
基本方案
單元8.10ELISA檢測抗體的含量
基本方案
單元8.11ELISPOT檢測抗體的含量
基本方案ELISPOT檢測分泌抗體的細胞
備選方案用ELISPOT檢測儀檢測分泌抗體的細胞
單元8.12抗體的體內誘導和檢測
基本方案1蛋白質或多糖抗原體內法誘導抗體的產生
基本方案2ELISA法檢測體內抗體的產生
輔助方案肺炎球菌多糖與蛋白質的偶聯
單元8.13T細胞殺傷功能的檢測
基本方案1抗CD3誘導的T細胞殺傷實驗
基本方案2抗原誘導的特異性T細胞殺傷功能的檢測
單元8.14NK/LAK細胞殺傷活性的檢測
基本方案51Cr釋放法檢測NK/LAK細胞殺傷活性
輔助方案腫瘤靶細胞的製備和標記
單元8.15人T細胞的克隆和擴增
基本方案1抗原特異性T細胞的誘導
基本方案2Th1或Th2細胞的誘導
輔助方案1T細胞的克隆
輔助方案2克隆後T細胞的擴增
輔助方案3T細胞克隆的凍存
單元8.16製備EBV轉化的B細胞
基本方案
單元8.17分離人腸黏膜單個核細胞
基本方案分離人腸黏膜單個核細胞
輔助方案用尼龍毛過濾器去除死細胞
單元8.18人樹突細胞分離和培養
基本方案1從外周單個核細胞中分離人樹突細胞
備選方案免疫磁珠法分離樹突細胞
基本方案2用單核細胞誘導人樹突細胞
單元8.19分離和鑑定人自然殺傷細胞亞群
基本方案從PBMC中分離人NK細胞
輔助方案人NK細胞亞群的表型和功能分析
第九章HIV的檢測與分析
單元9.1外周血中HIV的分離和定量檢測
基本方案1外周血中HIV的培養以及通過TCID定量來測定其滴度
基本方案2感染同種異型T淋巴母細胞：原代分離PBMC中的HIV
輔助方案評估HIV對CD4+靶細胞的致細胞病變效應：HIV介導的細胞死亡
單元9.2感染CD4+原代細胞系及HIV的誘導
基本方案1用HIV體外急性感染CD4+原代細胞及細胞系
基本方案2建立HIV慢性感染細胞系
基本方案3慢性感染細胞系中HIV的誘導
單元9.3在單核細胞和巨噬細胞中培養HIV
基本方案單核細胞來源的巨噬細胞培養和HIV感染
備選方案用HIV懸液感染單核細胞來源的巨噬細胞
輔助方案1擴增實驗室保存的親巨噬細胞的HIV-1病毒株
輔助方案2擴增原代分離的親巨噬細胞的HIV-1病毒株
單元9.4HIV蛋白的檢測
基本方案1免疫印跡法檢測HIV蛋白
基本方案2免疫螢光法檢測HIV蛋白
備選方案流式細胞儀分析細胞內HIV蛋白
基本方案3HIV反轉錄酶活性檢測
單元9.5用PCR檢測HIV的DNA及RNA
基本方案1用PCR擴增及檢測HIV的DNA
基本方案2用RT-PCR檢測HIV的RNA
單元9.6體外評價各種製劑的抗HIV活性
基本方案1保護靶T細胞免受HIV致細胞病變效應
基本方案2表達CD4的HeLa細胞合胞體斑形成抑制試驗
基本方案3ELISA檢測抗病毒劑對PBMC中HIVp24抗原產生的抑制作用
輔助方案50%抑制濃度（IC50）的計算
單元9.7基於痘苗病毒報導基因細胞融合檢測法定量功能性測定HIV包膜糖蛋白與受體的相互作用
基本方案用質粒表達包膜蛋白及受體進行融合檢測
備選方案1用重組病毒對各種成分的融合試驗
備選方案2活化的可溶性CD4融合檢測
輔助方案1比色法測定融合依賴的報導基因活性
輔助方案2原位染色測定報導基因活性
第十章自身免疫性及炎症性疾病動物模型
單元10.1小鼠實驗性自身免疫性腦脊髓炎（EAE）
基本方案套用PLP和MBP蛋白或多肽主動誘導EAE
備選方案MBP或PLP特異性淋巴細胞被動轉移性誘導EAE
輔助方案1PLP蛋白的純化
輔助方案2MBP蛋白的純化
單元10.2大鼠佐劑性關節炎
基本方案佐劑性關節炎的誘導
輔助方案分枝桿菌懸液的製備
單元10.3膠原誘導性關節炎
基本方案誘導小鼠膠原性關節炎
輔助方案1II型膠原（CII）的純化
輔助方案2膠原（II）α1鏈的純化
輔助方案3膠原（II）α1鏈內溴化氰裂解片段的純化
輔助方案4小鼠關節炎的評定
輔助方案5檢測CIA小鼠T細胞對CII的增殖應答
單元10.4小鼠實驗性自身免疫性甲狀腺炎
基本方案1實驗性自身免疫性甲狀腺炎的誘導和評定
輔助方案小鼠甲狀腺球蛋白的製備
基本方案2誘導EAT耐受
單元10.5小鼠實驗性自身免疫性重症肌無力
基本方案EAMG的誘導和評定
輔助方案1AChR的抽提與親和純化
輔助方案2神經毒素3-瓊脂糖的製備
輔助方案3套用肌電圖評定EAMG
輔助方案4通過檢測抗AChR抗體來評定EAMG
輔助方案5小鼠肌肉AChR的製備
單元10.6NOD小鼠：一種胰島素依賴性糖尿病模型
基本方案1無特殊病原菌（SPF）級NOD小鼠的飼養
基本方案2胰島素依賴性糖尿病（IDDM）的診斷
備選方案半定量胰島炎以作為進展為IDDM的亞臨床表現
輔助方案胰腺中胰島細胞的分離
單元10.7通過耗竭調節性T細胞誘導自身免疫性疾病
基本方案通過胸腺切除術誘導年輕的成年大鼠糖尿病
備選方案套用胸腺切除術誘導3周齡大鼠糖尿病
單元10.8通過耗竭調節性T細胞誘導免疫缺陷小鼠炎症性腸道疾病
基本方案轉輸CD45RBhighCD4+T細胞誘導SCID小鼠IBD
輔助方案監測IBD進展
單元10.9氣道高反應性動物模型
基本方案套用OVA全身致敏及氣道激發誘導氣道超敏反應
輔助方案1使用全身體積氣壓描記器非侵入性檢測氣道反應性
備選方案OVA致敏氣道誘導氣道超敏反應
輔助方案2體外檢測氣道對電場刺激的反應性
輔助方案3T細胞功能和氣道炎症的評定
單元10.10誘導小鼠TNBS結腸炎
基本方案小鼠TNBS結腸炎的誘導和評定
輔助方案1分離小鼠腸系膜淋巴結細胞
輔助方案2分離結腸炎小鼠的黏膜固有層細胞
單元10.11系統性紅斑狼瘡動物模型
基本方案1ELISA檢測小鼠血清中抗染色質抗體
基本方案2單鏈和雙鏈DNA抗體的檢測
基本方案3ELISA檢測類風濕因子
基本方案4ELISA檢測同種異型特異性抗體時標準曲線的製作
備選方案ELISPOT檢測抗染色質抗體形成細胞
輔助方案1低滲裂解雞紅細胞核製備雞染色質
輔助方案2dsDNA的製備
輔助方案3基於PCR技術的faslpr突變體和fasLgld突變體的基因分型
第十一章傳染性疾病動物模型
單元11.1利什曼原蟲感染的小鼠模型
基本方案皮膚利什曼原蟲病小鼠模型
輔助方案1使用花生凝集素製備後發育期前鞭毛體
輔助方案2從足墊組織中純化無鞭毛體
輔助方案3前鞭毛體和無鞭毛體的冷藏和復甦
輔助方案4血瓊脂培養板的製備
單元11.2弓形蟲感染動物模型
基本方案1誘導小鼠急性弓形蟲T.gondii感染
基本方案2小鼠慢性弓形蟲腦炎模型
基本方案3感染T.gondii的重症聯合免疫缺陷小鼠
基本方案4溫度敏感的TS-4T.gondii菌株的感染模型
輔助方案1對T.gondii感染進展和免疫應答的評估
輔助方案2ME49T.gondii包囊種子庫的維持和保存
輔助方案3用人類包皮成纖維細胞保存T.gondii速殖子
輔助方案4小鼠體內保存T.gondii速殖子
輔助方案5T.gondii裂解物抗原的準備
單元11.3巨細胞病毒感染小鼠模型的建立
基本方案巨細胞病毒感染小鼠模型
輔助方案1巨細胞病毒的準備
輔助方案2唾液腺病毒的製備
輔助方案3用空斑形成細胞試驗測定巨細胞病毒滴度
輔助方案4原代小鼠胚胎成纖維細胞的製備
單元11.4單核細胞增生性利斯特氏菌感染動物模型
基本方案用單核細胞增生性利斯特氏菌株感染小鼠
輔助方案1小鼠感染利斯特氏菌後的特異性和固有免疫反應評估
輔助方案2利斯特氏菌特異性T細胞的製備
單元11.5淋巴細胞脈絡叢腦膜炎病毒感染動物模型
基本方案1全身性感染LCMV小鼠模型
基本方案2LCMV病毒持續感染小鼠模型
基本方案3T細胞對LCMV免疫反應的測定
基本方案4LCMV疫苗效果的體內檢測
輔助方案1LCMV病毒儲存液的製備
輔助方案2噬菌斑試驗測定LCMV病毒滴度
輔助方案3ELISA檢測LCMV抗體
單元11.6流感病毒
基本方案1流感病毒鼻腔內感染麻醉的小鼠
備選方案流感病毒鼻腔內感染未麻醉小鼠
輔助方案1流感病毒在雞胚中擴增
輔助方案2雞胚尿囊液內流感病毒滴度的測定
輔助方案3MDCK細胞的長期培養
輔助方案4培養組織流感病毒感染劑量（TCID50）的測定
輔助方案5小鼠50%致死劑量（MLD50）和小鼠50%感染劑量（MID50）
輔助方案6檢測流感病毒滴度的小鼠肺臟製備
輔助方案7流感病毒儲存液中血凝單位的測定
輔助方案8小鼠血清的血凝抑制試驗（HAI）
輔助方案9流感病毒儲存液（原液）的系列稀釋
基本方案2從脾臟前體細胞獲得流感病毒特異性的細胞毒T淋巴細胞（CTL）
基本方案3收集含抗流感病毒CTL的肺臟細胞
輔助方案10流感病毒中和試驗
第十二章蛋白質分離和分析
單元12.1免疫親和層析
基本方案可溶性或膜結合抗原的分離
備選方案1抗原低pH洗脫
備選方案2用辛烷基β-D-葡糖苷洗脫抗原
單元12.2免疫沉澱
基本方案1用非變性去垢劑裂解細胞製成的懸液進行免疫沉澱
備選方案1用含非變性去垢劑溶液裂解的貼壁細胞進行免疫沉澱
備選方案2用含變性去垢劑裂解液裂解的細胞進行免疫沉澱
備選方案3用無去垢劑裂解液裂解的細胞進行免疫沉澱
備選方案4用抗體-Sepharose進行免疫沉澱
輔助方案抗體Sepharose的製備
備選方案5用與ANTI-Ig結合的放射性標記的抗原進行免疫沉澱
基本方案2再次捕獲免疫沉澱
單元12.3單向蛋白質凝膠電泳
基本方案
單元12.4凝膠蛋白質染色
基本方案1考馬斯亮藍染色
基本方案2銀染
基本方案3SYPROOrange或SYPRORed螢光染色
基本方案4SYPRORuby螢光染色
備選方案1聚丙烯醯胺凝膠上磷蛋白的特異性螢光染色
輔助方案磷酸酪氨酸殘基的特異性檢測
備選方案2同一塊凝膠上的糖基化蛋白和非糖基化蛋白的差異性螢光染色
單元12.5免疫印跡和免疫檢測
基本方案1液體容器中的蛋白質印跡
備選方案1半乾膠系統蛋白質印跡
輔助方案1轉移蛋白的可逆染色
基本方案2採用二抗檢測的免疫探針法
備選方案2親和素生物素化二抗的免疫探針法
基本方案3生色底物顯色
備選方案3生色底物顯色
輔助方案2膜蛋白解離與再生
第十三章肽
單元13.1合成肽用以製備識別完整蛋白質的抗體
基本方案1通過計算機輔助方法選擇合適的抗原肽序列
備選方案1通過人工篩查挑選合適的肽序列
基本方案2設計一條肽鏈與載體蛋白相偶聯
備選方案2設計合成一條多價抗原肽
基本方案3使用雙功能團試劑將合成肽偶聯至載體蛋白
備選方案3使用雙功能團試劑將合成肽偶聯至載體蛋白
輔助方案計算肽連線到載體蛋白上的摩爾率
單元13.2抗多肽血清的製備
基本方案1在兔體內製備抗多肽血清的免疫接種流程
基本方案2用間接ELISA法檢測抗多肽抗體滴度
基本方案3使用酸性、鹼性或離液洗脫液的親和層析柱
輔助方案1預先溶脹的NHS或CNBr活化樹脂的肽免疫親和層析柱的製備
輔助方案2巰基化樹脂填充的肽親和層析柱的製備
單元13.3採用合成肽組合庫鑑定B細胞和T細胞的表位
基本方案1採用PS-SCL篩選抗體抑制劑
基本方案2篩查PS-SCL鑑定CD4+或CD8+T細胞的配體
輔助方案最佳化用於篩查的抗原和抗體濃度
第十四章分子生物學
單元14.1293T細胞包裝和擴增反轉錄病毒
基本方案1磷酸鈣/DNA沉澱瞬時轉染Phoenix反轉錄包裝細胞
備選方案1水皰性口炎病毒G蛋白的假型反轉錄病毒
輔助方案1水皰性口炎病毒G蛋白假型反轉錄病毒的濃縮和低溫儲存
輔助方案2Phoenix細胞的培養
基本方案2感染貼壁細胞
備選方案2貼壁細胞快速（spin）感染（見基本方案2）
備選方案3懸浮細胞的快速（spin）感染
單元14.2免疫球蛋白融合蛋白的構建
基本方案1免疫球蛋白融合蛋白的構建
基本方案2免疫球蛋白融合基因分析
單元14.3單鏈抗體的噬菌體展示技術
基本方案1全套單鏈抗體噬菌體載體的構建
基本方案2scFv展示噬菌體在抗原包被板上的親和篩選
備選方案鏈霉親和素包被的磁珠富集篩選生物素化抗原結合的scFv展示噬菌體
基本方案3ELISA鑑定抗原結合的scFv展示噬菌體
輔助方案1輔助噬菌體凍存液的配製
輔助方案2指紋圖譜和PCR檢測克隆的正確性和多樣性
輔助方案3蛋白質的生物素化（NHS-SS-生物素）
輔助方案4利用生物素蛋白連線酶使蛋白生物素化
單元14.4整體培養中同型轉換重排的PCR檢測
基本方案1通過轉換接頭的直接PCR
輔助方案通過PCR和隨機引物標記法製備5′Sμ探針
基本方案2消化環化PCR
單元14.5PCR檢測細胞因子mRNA的表達
基本方案定量IL-2mRNA表達水平
單元14.6PCR檢測人T細胞受體基因的表達
基本方案PCR檢測人T細胞受體基因的表達
備選方案PCR定量檢測TCR可變序列轉錄產物
輔助方案1重排V-D-J區測序
輔助方案2cDNA合成
單元14.7PCR檢測小鼠T細胞受體表達
基本方案1PCR分析小鼠TCR基因表達
基本方案2PCR檢測小鼠TCR可變區的頻率
基本方案3對小鼠可變區轉錄物進行PCR定量
基本方案4序列分析V（D）J區的接頭多樣性
輔助方案cDNA合成用於小鼠TCR基因表達的PCR分析
單元14.8TCR庫的抗原譜/免疫掃描技術分析
基本方案1人和小鼠TCR受體庫多樣性的免疫掃描技術分析
備選方案利用[32P]dCTP進行免疫掃描分析
基本方案2連結區引物進行高特異的分光光度分析
基本方案3TCR基因擴增產物的快速高通量測序
單元14.9多探針核糖核酸酶保護試驗同時測定mRNA表達
基本方案多探針核糖核酸酶保護試驗
輔助方案1構建一個核糖探針模板
輔助方案2凝膠電泳和結果的可視化
單元14.10端粒長度和端粒酶活性的分析
基本方案1Southern雜交檢測傳統凝膠電泳中末端端粒DNA限制性片段（TRF）的端粒長度
備選方案1尼龍膜上的Southern雜交
輔助方案1端粒或其他寡聚核苷酸末端標記
基本方案2用脈衝電場凝膠電泳法測量端粒
基本方案3螢光原位雜交
基本方案4QFISH
輔助方案2從分裂的淋巴細胞中製備分裂中期染色體
基本方案5端粒酶活性的測定
備選方案2非放射性的TRAP分析方法1：螢光染料（SYBRI）標記
備選方案3非放射性的TRAP分析方法2：螢光染料（TAMRA-TS）標記
第十五章免疫分子與受體工程學
單元15.1用MHC-Ig二聚體檢測抗原特異性T細胞
基本方案構建MHCI-Ig二聚體
輔助方案1測定MHC-Ig融合蛋白濃度
輔助方案2J558L轉染細胞大規模培養及上清的濃縮
輔助方案3用5-碘-4-羥基-3-硝基酚乙醯-瓊脂糖凝膠層析法純化MHC-Ig二聚體
輔助方案4製備5-碘-4-羥基-3-硝基酚乙醯-瓊脂糖凝膠
輔助方案5通過被動交換法為MHC-Ig嵌合蛋白負載多肽
輔助方案6鹼洗脫法負載多肽
輔助方案7溫和酸性條件下負載多肽
輔助方案8流式細胞分析抗原特異性T細胞
單元15.2用MHC肽四聚體顯現抗原特異性T細胞
基本方案1製備帶BirA底物標籤的MHCI類分子亞單位的包含體
基本方案2MHCI類分子肽複合物的重新摺疊
輔助方案1用ELISA測定MHC
輔助方案2用分子大小排阻層析法進行超濾和純化以濃縮摺疊蛋白
基本方案3用酶進行生物素化、純化及生物素化效率的分析
基本方案4用鏈親和素使生物素化的單體形成多聚體
基本方案5用標記的MHCI類分子四聚體通過流式細胞分析含特異性T細胞受體的細胞
附錄1試劑與溶液
附錄2實驗用小鼠、大鼠和倉鼠
附錄2A常用小鼠和大鼠品系
附錄2B飼養
附錄2C處理和捕捉
基本方案1小鼠的處理和捕捉
基本方案2大鼠的處理和捕捉
基本方案3倉鼠的處理和捕捉
備選方案嚙齒類動物捕捉器
附錄2D麻醉
基本方案1小鼠、大鼠和倉鼠的注射麻醉
基本方案2用甲氧氟烷吸入法麻醉小鼠、大鼠和倉鼠
附錄2E腹腔注射
基本方案1小鼠、大鼠和倉鼠的肌肉注射
基本方案2小鼠、大鼠和倉鼠的皮內注射
基本方案3小鼠、大鼠和倉鼠的皮下注射
基本方案4小鼠的靜脈注射
基本方案5小鼠、大鼠和倉鼠的腹膜內注射
基本方案6小鼠足墊注射
基本方案7小鼠胸腺內注射
附錄2F血液收集
基本方案1小鼠和大鼠的眼眶或眼血管叢取血
基本方案2小鼠和大鼠的尾靜脈微量採血管取血
備選方案從小鼠和大鼠的尾靜脈以離心管取血
基本方案3小鼠腋窩叢取血
附錄2G安樂死
基本方案1二氧化碳窒息
基本方案2過量戊巴比妥注射
備選方案1麻醉下放血
備選方案2小鼠頸椎脫臼
附錄2H淋巴器官和胸腺的摘除
基本方案1小鼠淋巴器官的摘除
基本方案2脾切除術
備選方案脾半切除術
基本方案3新生鼠胸腺摘除
基本方案4成年鼠的胸腺摘除術
輔助方案胸腺吸入套管的製備
附錄3免疫學常用細胞實驗技術
附錄3A細胞生長的檢測
基本方案1血細胞計數板計數細胞
基本方案2庫爾特粒度儀計數細胞
附錄3B細胞凍存
基本方案1細胞株或雜交瘤的凍存
基本方案2細胞株或雜交瘤細胞的復甦
附錄3C台盼藍拒染試驗檢測細胞活力
基本方案
附錄3D瑞氏吉姆薩和非特異性酯酶染色
基本方案1瑞氏吉姆薩染色通常用於淋巴細胞形態的研究
基本方案2非特異性酯酶染色
附錄3E3HTdR的摻入
基本方案
附錄3F判斷並處理細胞培養中的支原體污染
基本方案1檢測可能存在的支原體污染
基本方案2用BM-cyclin處理污染的細胞
備選方案用環丙沙星處理支原體污染的細胞
附錄3G人外周血單個核細胞的分離
基本方案靜脈穿刺採集外周血
備選方案淋巴細胞去除法取血
附錄4試劑和設備的供應商
參考文獻
索引
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