空斑純化法

由於在重組病毒中多角體基因被外源基因所取代,因此形成的子代病毒不含有包含體,為包含體陰性病毒。包含體陰性病毒與包含體陽性病毒(由野生型病毒形成)在平板中形成的空斑形態是不同的。因此,可在光學顯微鏡下,利用這一特徵篩選出含外源基因的重組病毒並加以純化,這正是空斑純化法。

在桿狀病毒系統中,要獲得蛋白質的有效表達,首先要選擇合適的轉染載體。依據表達的蛋白質屬融合型或非融合型,選擇單啟動子型或多啟動子型。另外目的基因的選擇要注意以下因素:①該目的基因應不含內含子;②去除其mRNA 5′端非編碼區的異源序列;③翻譯啟始密碼子AUG應處於適當的序列之間(如Kozak 序列),通常認為其上游 -3位的鹼基為A時最佳;

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