稀釋法藥敏試驗是指將一定濃度的抗菌藥物按照指南進行稀釋後與肉湯或瓊脂混合製成培養基，再接種受試菌株，經孵育培養後觀察細菌生長情況，進行藥敏結果分析。此法較少套用於臨床檢測，多用於罕見耐藥的調查。在肉湯或瓊脂中將抗菌藥物進行一系列（對倍）稀釋後，定量接種待檢菌，35攝氏度孵育24小時後觀察。抑制待檢菌肉眼可生長的最低藥物濃度，即為該藥物對待檢菌的最低抑菌濃度。
基本介紹
- 中文名：稀釋法藥敏試驗
- 臨床意義：用於調查罕見耐藥
試驗原理,試驗步驟,注意事項,臨床意義,
試驗原理
將一定濃度的抗菌藥物稀釋至不同濃度後接種受試菌株，通過測定菌株在不同濃度藥物培養基內的生長情況可定量檢測該藥物的最低抗菌濃度（MIC）、最小殺菌濃度（MBC）、可抑制50%受試菌的MIC（MIC50）、可抑制90%受試菌的MIC（MIC90）。
試驗步驟
稀釋法藥敏試驗主要有試管肉湯稀釋法、微量肉湯稀釋法、瓊脂稀釋法等方法，其主要區別為培養基不同，但試驗步驟基本一致。
1.藥物稀釋
按照美國臨床和實驗室標準協會（CLSI）制訂的指南進行藥物原液製備和稀釋。
2.菌液製備
挑取培養好的受試菌製備成0.5麥氏單位菌懸液。
3.菌株接種
菌懸液配置完畢後15分鐘內，按照試管肉湯稀釋法和微量肉湯稀釋法最終接種菌量為105CFU/ml，瓊脂稀釋法最終接種菌量為104CFU/點進行接種。
4.孵育培養
接種完畢後將培養基放入35℃培養箱中培養16~20小時。嗜血桿菌屬、鏈球菌屬培養時間為20~24小時，苯唑西林和萬古黴素對葡萄球菌和腸球菌的培養時間為24小時。
5.結果分析
檢查對照組生長情況，以肉眼或比濁劑觀察讀取所需數據。
1.藥物稀釋
按照美國臨床和實驗室標準協會（CLSI）制訂的指南進行藥物原液製備和稀釋。
2.菌液製備
挑取培養好的受試菌製備成0.5麥氏單位菌懸液。
3.菌株接種
菌懸液配置完畢後15分鐘內，按照試管肉湯稀釋法和微量肉湯稀釋法最終接種菌量為105CFU/ml，瓊脂稀釋法最終接種菌量為104CFU/點進行接種。
4.孵育培養
接種完畢後將培養基放入35℃培養箱中培養16~20小時。嗜血桿菌屬、鏈球菌屬培養時間為20~24小時，苯唑西林和萬古黴素對葡萄球菌和腸球菌的培養時間為24小時。
5.結果分析
檢查對照組生長情況，以肉眼或比濁劑觀察讀取所需數據。
注意事項
1.保證抗菌藥物質量
抗菌藥物應直接從廠商或相關機構獲取，實際濃度依據說明書進行換算，藥品應按照說明書要求或於-20℃下乾燥冷藏，製備好的藥液應無菌並至少為-60℃冷凍保存，融化後應24小時內使用，未使用的不可再次使用。
2.培養基的要求
肉湯稀釋法中，非苛養菌可選擇陽離子調節的MH肉湯，對苛養菌中有特殊要求的如嗜血桿菌屬、鏈球菌屬可分別選擇HTM培養基、含5%脫纖維馬血CAMHB。瓊脂稀釋法中，一般選擇MHA瓊脂，特殊細菌如淋病奈瑟菌則用含1%生長因子的GC瓊脂。檢測葡萄球菌對苯唑西林、甲氧西林、萘夫西林的敏感性時，培養基中須含有最終濃度為2%的NaCl。
3.結果分析
如結果觀察到跳孔現象應檢查培養物純度或重新進行試驗。
抗菌藥物應直接從廠商或相關機構獲取，實際濃度依據說明書進行換算，藥品應按照說明書要求或於-20℃下乾燥冷藏，製備好的藥液應無菌並至少為-60℃冷凍保存，融化後應24小時內使用，未使用的不可再次使用。
2.培養基的要求
肉湯稀釋法中，非苛養菌可選擇陽離子調節的MH肉湯，對苛養菌中有特殊要求的如嗜血桿菌屬、鏈球菌屬可分別選擇HTM培養基、含5%脫纖維馬血CAMHB。瓊脂稀釋法中，一般選擇MHA瓊脂，特殊細菌如淋病奈瑟菌則用含1%生長因子的GC瓊脂。檢測葡萄球菌對苯唑西林、甲氧西林、萘夫西林的敏感性時，培養基中須含有最終濃度為2%的NaCl。
3.結果分析
如結果觀察到跳孔現象應檢查培養物純度或重新進行試驗。
臨床意義
藥物最低濃度管無細菌生長者（對照管細菌生長良好），即為待檢菌的最低抑菌濃度（MIC）。常規的稀釋法藥敏試驗操作步驟繁瑣，臨床套用較少，多用於調查罕見耐藥；調查藥敏定性敏感而臨床療效不佳的原因；確定藥敏定性中介的敏感性；選擇二線藥物；新藥評價。商品化的微量稀釋板操作方便，已廣泛套用於臨床，可指導藥物劑量。
