超廣譜β-內醯胺酶檢測

超廣譜β-內醯胺酶（Extended Spectrum Beta-Lactamases，ESBLs）是以滅活窄譜和廣譜頭孢菌素、單環類抗生素及抗-革蘭陰性桿菌青黴素等抗生素為特徵的β-內醯胺酶。大腸桿菌、肺炎克雷伯桿菌、鮑曼不動桿菌等通常最易生產，其次，陰溝腸桿菌、粘質沙雷氏菌、弗勞地枸櫞酸菌、綠膿桿菌也可生產。其特點是可以水解滅活青黴素類抗生素、頭孢菌素（主要為第三代頭孢菌素，如頭孢他啶、頭孢哌酮等，馬斯平等除外）和單環β-內醯胺類抗生素（氨曲南、卡蘆莫南等），通常不水解頭孢黴素類（頭孢西丁、頭孢美唑等）和碳青黴烯類（亞胺培南、美羅培南等）。其活性可以被克拉維酸、舒巴坦、他唑巴坦等β-內醯胺酶抑制劑所抑制。臨床常用紙片擴散法、稀釋法（包括篩選和確證兩種試驗）進行檢測。

基本介紹

• 中文名：超廣譜β-內醯胺酶檢測
• 外文名：Extended Spectrum Beta-Lactamases detection
• 臨床意義：陽性預示對頭孢泊肟等抗菌藥無效

實驗方法

1.紙片擴散法
（1）初篩試驗：選用頭孢泊肟、頭孢他啶、氨曲南、頭孢噻肟或頭孢曲松(每片含量均為30μg)藥敏紙片中的至少2種，用苗勒-欣頓(MHA)瓊脂，標準紙片擴散法測試抑菌環直徑，按美國臨床實驗室標準化委員會(NCCLS)1997年標準進行判斷。凡頭孢泊肟或頭孢他啶的抑菌環直徑≤22mm，頭孢曲松≤25mm，氨曲南或頭孢噻肟≤27mm，均應高度懷疑為ESBLs菌株，應進一步作確認試驗來加以確診。
（2）表型確證試驗：用頭孢他啶(每片30μg)和頭孢他啶加克拉維酸(30μg和10μg)；頭孢噻肟(每片30μg)和頭孢噻肟加克拉維酸(30μg和10μg);分別測量2種紙片單獨及加克拉維酸的抑菌環直徑。加克拉維酸和不加克拉維酸的抑菌環直徑≥5mm可確認為ESBLs菌株。。
2.微量肉湯稀釋法
（1）初篩試驗：原理同ESBLs紙片擴散法步驟：將大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌配成相應濁度的菌懸液，加入含有以下濃度藥物的微量反應板中，頭孢泊肟、頭孢他啶、氨曲南、頭孢噻肟、頭孢曲松。然後將接種了待測菌的反應板置於35℃環境下，孵育16～18小時後觀察細菌在不同藥物中的生長現象。
（2）表型確證試驗：按照藥敏試驗的微量肉湯稀釋法，將大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌配成相應濁度的菌懸液，加入含有以下梯度濃度藥物的微量反應板中，頭孢他啶的濃度範圍為0.25～128μg/ml，頭孢他啶/克拉維酸為0.25/4～128/4μg/ml，頭孢噻肟為0.25～64μg/d，頭孢噻肟/克拉維酸為0.25/4～64/41μg/ml。置於35℃環境下，孵育16～18小時後觀察在不同濃度藥物中的生長現象。

臨床意義

ESBL陽性預示對頭孢泊肟、頭孢他啶、頭孢噻肟、頭孢曲松和氨曲南等抗菌藥物無效。一旦確定為產ESBLs菌株，應立即停止使用第三代頭孢菌素和單環β-內醯胺類抗生素的治療。對付產ESBLs菌株，最有效的抗生素為碳青黴烯類，亞胺培南、美羅培南等較為常用。其次，頭黴素類中的頭孢西丁、頭孢美唑等對其也有效。

注意事項

產ESBL的克雷伯菌和大腸埃希菌分離株，即使藥敏試驗時部分藥物敏感，均應視為耐所有青黴素、頭孢菌素和氨曲南。