物理基因圖譜

物理基因圖譜是利用限制性內切酶將染色體切成片段,再根據重疊序列確定片段間連線順序,以及遺傳標誌之間物理距離鹼基對(bp) 或千鹼基(kb)或兆鹼基(Mb)的圖譜。以人類基因組物理圖譜為例,它包括兩層含義,一是獲得分布於整個基因組30 000個序列標誌位點(STS,其定義是染色體定位明確且可用PCR擴增的單拷貝序列)。

將獲得的目的基因的cDNA克隆,進行測序,確定兩端的cDNA序列,約200bp,設計合成引物,並分別利用cDNA和基因組DNA作模板擴增;比較並純化特異帶;利用STS製備放射性探針與基因組進行原位雜交,使每隔100kb就有一個標誌;二是在此基礎上構建覆蓋每條染色體的大片段

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