發光劑是指在發光反應中參與能量轉移並最終以發射光子的形式釋放能量的化合物，根據上述發光特點可將發光劑分為螢光素、生物發光劑和化學發光劑三種。常用的化學發光劑有以三種，酶促反應的發光底物的發光劑，直接化學發光劑，電化學發光劑。
基本介紹
- 中文名：化學發光劑
- 學科：化學
- 類型：光照發光、生物發光和化學發光
- 常用發光劑：直接化學發光劑，電化學發光劑
類型,常用發光劑,
類型
一種物質由電子激發態回復到基態時，釋放出的能量表現為光的發射，稱為發光 (luminescence)。根據形成激發態分子的激發能可將發光分為三種類型:光照發光、生物發光和化學發光。
常用發光劑
酶促反應的發光底物
酶促反應的發光底物是指經酶的降解作用而發出光的一類發光底物，目前化學發光酶免疫技術中常用的酶有辣根過氧化物酶（HRP）和鹼性磷酸酶（AP）。HRP的發光底物為魯米諾或其衍生物和對-羥基苯乙酸。AP的發光底物為3-（2-螺旋金剛烷-4-甲氧基-4-甲基-4-（3-磷酸氧基）-苯基-1，2-二氧乙烷（AMPPD）和4-甲基傘形酮磷酸鹽（4-MUP，螢光底物）。
（1）.魯米諾或其衍生物。 魯米諾的氧化反應在鹼性緩衝液中進行，通常以0.1mol/L pH8.6Tris緩衝液作底物液。要注意是:首先,魯米諾和H2O2在無HRP催化時也能緩慢自發發光，而在最後光強度測定中造成空白干擾，因而宜分別配製成2瓶試劑溶液，只在用前即刻混合;其次, HRP發光增強劑如某些酚試劑（如鄰－碘酚）或螢火蟲螢光素酶可增強HRP催化魯米諾氧化的反應和延長發光時間，提高發光敏感度。
（3）.AMPPD。 AMPPD在鹼性條件下，被ALP酶解生成相當穩定的AMP-D陰離子，其有2-30min的分解半衰期，發出波長為470nm的持續性光，在15min時其強度達到高峰，15-60min內光強度保持相對穩定。
（4）4-MUP。 4-MUP被ALP催化生成4-甲基傘形酮，在360nm的激發光的作用下，發出448nm的螢光，用螢光光度計進行測量。
直接化學發光劑
直接化學發光劑不需酶的催化作用，只需改變溶液的pH等條件就能發光的物質，如吖啶酯（acridinium, AE）在有過氧化氫的稀鹼溶液中即能發光。
電化學發光劑
電化學發光劑是指通過在電極表面進行電化學反應而發出光的物質。化學發光劑三聯吡啶釕[Ru(bpy)3]2+（圖16-7）和電子供體三丙胺（TPA）在陽性電極表面可同時失去一個電子而發生氧化反應。二價的[Ru(bpy)3]2+被氧化成三價，成為強氧化劑，TPA失去電子後被氧化成陽離子自由基TPA+，它很不穩定，可自發地失去一個質子（H+），形成自由基TPA.，成為一種很強的還原劑，可將一個高能量的電子遞給三價的[Ru(bpy)3]3+使其形成激發態的[Ru(bpy)3]2+.。激發態的三聯吡啶釕不穩定，很快發射出一個波長為620nm的光子，回復到基態的三聯吡啶釕。這一過程可在電極表面周而復始地進行，產生許多光子，使光信號增強。
