分離純化蛋白質

分離純化蛋白質的方法有透析、超濾法、鹽析,透析是利用透析袋把大分子蛋白質與小分子化合物分開的方法。

基本介紹

  • 中文名:分離純化蛋白質
  • 方法1:透析
  • 方法2:超濾法 
  • 方法3:鹽析
分離方法,電泳操作,

分離方法

* 透析(dialysis)利用透析袋把大分子蛋白質與小分子化合物分開的方法。
* 超濾法
套用正壓或離心力使蛋白質溶液透過有一定截留分子量的超濾膜,達到濃縮蛋白質溶液的目的。
*丙酮、乙醇等有機溶劑沉澱法,可破壞蛋白質的水化層,在0~4℃低溫下,使蛋白質沉澱。環境溫度高等不良因素影響下,有機溶劑可促使蛋白質變性。
*鹽析(salt precipitation)是將硫酸銨、硫酸鈉或氯化鈉等加入蛋白質溶液,使蛋白質表面電荷被中和以及水化膜被破壞,導致蛋白質沉澱。
* 免疫沉澱法:利用特異抗體識別相應的抗原蛋白,並形成抗原抗體複合物的性質,可從蛋白質混合溶液中分離獲得抗原蛋白。
* 電泳法:蛋白質在高於或低於其pI的溶液中為帶電的顆粒,在電場中能向正極或負極移動。這種通過蛋白質在電場中泳動而達到分離各種蛋白質的技術, 稱為電泳(elctrophoresis) 。幾種重要的蛋白質電泳:

電泳操作


*SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳,常用於蛋白質分子量的測定。
*等電聚焦電泳,通過蛋白質等電點的差異而分離蛋白質的電泳方法。
*雙向凝膠電泳是蛋白質組學研究的重要技術。
分離純化蛋白質分離純化蛋白質
* 層析(chromatography)或色譜法:待分離蛋白質溶液(流動相)經過一個固態物質(固定相)時,根據待分離蛋白質的顆粒大小、電荷多少及親和力等,使蛋白質組分在兩相中反覆分配,並以不同速度流經固定相而分離蛋白質。凝膠過濾(分子篩,gel filtration;排阻色譜):利用各蛋白質分子大小不同分離。
離子交換:蛋白質的電荷量及性質不同。
陽離子交換劑:CM-纖維素
陰離子交換劑:DEAE-纖維素
親和層析:抗原-抗體,配體-受體,金屬離子,生物素等
高效液相(HPLC):反相HPLC,離子HPLC,凝膠過濾HPLC
* 超速離心法(ultracentrifugation):根據蛋白質的分子量與形狀分離。

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