本書共11章，系統地介紹了生物樣品的冰凍處理、快速冰凍固定方法和
免疫細胞化學技術。除介紹當前在分子生物學上廣泛使用的各種冰凍免疫顯
微標記技術外，還重點介紹了近年來發展的超薄冰凍切片、高壓冰凍固定、
光學和電子顯微鏡對應定位和冰凍負染色等新技術。書中在講述方法的同時
，簡述技術原理，並通過圖表和實例解釋技術要點，還針對實驗中易出現的
問題提出了解決辦法。
本書可作為大學生和研究生的參考教材，並可作為從事生物、醫藥、醫
學研究和臨床診斷相關教學和研究人員的參考書。
基本介紹
- 書名：冰凍顯微免疫標記的技術
- 作者：黃炳權
- ISBN：9787122010773
- 頁數：236 頁
- 出版社：化學工業出版社
- 出版時間：2007年10月
內容簡介,本書目錄,
內容簡介
本書共11章，系統地介紹了生物樣品的冰凍處理、快速冰凍固定方法和免疫細胞化學技術。除介紹當前在分子生物學上廣泛使用的各種冰凍免疫顯微標記技術外，還重點介紹了近年來發展的超薄冰凍切片、高壓冰凍固定、光學和電子顯微鏡對應定位和冰凍負染色等新技術。書中在講述方法的同時，簡述技術原理，並通過圖表和實例解釋技術要點，還針對實驗中易出現的問題提出了解決辦法。
本書可作為大學生和研究生的參考教材，並可作為從事生物、醫藥、醫學研究和臨床診斷相關教學和研究人員的參考書。
本書目錄
第1章
冰凍顯微免疫細胞化學的發展和套用
1.1 歷史筒述和技術發展
1.2 標記方法的選擇
1.3 顯微免疫細胞化學在分子生物學和醫學研究的套用
1.3.1 在細胞分子生物學中的套用
1.3.2 在病理學和腫瘤診斷中的套用
第2章
冰凍切片和光學顯微鏡的免疫細胞化學
2.1 免疫標記的基本原理
2.1.1
抗體的種類
2.1.2
抗體的結構
2.1.3
抗原定位標記物
2.1.4
抗體的標記方式
2.1.5 抗體對不同抗原的雙重或多重標記
2.2
抗體特異性測定和實驗對照
2.2.1
測定新的第一抗體
2.2.2
抗體所引起的非特異性染色
2.2.3 防止非特異性標記的方法
2.3 生物樣品的處理和冰凍切片
2.3.1 大組織塊的冰凍切片方法
2.3.2
冰凍半薄切片方法
2.4
免疫螢光標記
2.4.1
抗體和標記方法的選擇
2.4.2 螢光染料的特性和選擇
2.4.3
雙重或多重螢光標記
2.4.4
標記的步驟
2.5 免疫過氧化物酶顯色標記
2.5.1 抗生物素蛋白一生物素方法
2.5.2 快速臨床免疫組織化學染色方法
2.6 免疫標記出現問題的處理
2.7
免疫標記實例
2.7.1 老鼠膽管纖毛的冰凍半薄切片螢光標記
2.7.2 用螢光和冰凍超薄切片對人胎盤抗原定位
2.7.3 快速免疫組織化學染色
第3章
冰凍超薄切片和電子顯微鏡的免疫金標記
3.1 引言
3.2
設備和試劑的準備
3.2.1
冰凍切片機
3.2.2
切片刀
3.2.3
支持膜製作和碳覆蓋
3.2.4 免疫金粒標記物的製備
3.3 生物樣品的固定和處理方法
3.3.1 固定劑
3.3.2 其他影響固定質量的條件
3.3.3 固定程式
3.3.4
樣品包埋處理
3.3.5
蔗糖冰凍保護
3.3.6
樣品的安放和冰凍
3.4
冰凍超薄切片
3.4.1 樣品的初修整和半薄切片
3.4.2
樣品塊的細修整
3.4.3
冰凍超薄切片
3.4.4
切片的收集
3.4.5 冰凍切片的保存
3.5 免疫標記
3.5.1
標記方法和程式
3.5.2 蛋白A法
3.5.3 IgG法
3.6 圖像的分析和問題處理
3.7 套用實例
3.7.1 蛋白A標記的套用例子
3.7.2 IgG方法的套用例子
第4章
快速冰凍固定方法
4.1 引言
4.2
冰凍固定的原理
4.3
冰凍保護劑
4.3.1
滲透性冰凍保護劑
4.3.2 非滲透性冰凍保護劑
4.4 冰凍固定的主要方法
4.4.1
插入式冰凍方法
4.4.2 冷金屬塊撞擊式冰凍固定
4.4.3 丙烷噴射冰凍固定
4.4.4
噴灑式冰凍固定
4.4.5
高壓冰凍固定
第5章
高壓冰凍固定
5.1 高壓冰凍固定的基本原理
5.2
樣品處理和裝放的關鍵步驟
5.2.1
樣品載體
5.2.2 載體內細胞和組織的填充劑
5.2.3
冰凍保護劑
5.2.4
樣品的裝放
5.3
冰凍樣品的處理
5.4 常規化學固定和高壓冰凍固定效果的比較
5.4.1 化學固定和高壓冰凍固定的比較
5.4.2 高壓冰凍固定的局限性
5.5 冰凍固定過程中出現的問題和解決方法
5.5.1 高壓冰凍固定的注意事項
5.5.2 冰凍固定過程中出現的問題和解決方法
第6章
冰凍置換
6.1 概述
6.2
冰凍置換的條件
6.2.1 冰凍置換的溫度和材料的準備
6.2.2
冰凍置換的有機溶劑的選擇和評估
6.2.3
冰凍置換裝置
6.3
冰凍置換方法
6.3.1 加入固定劑的冰凍置換
6.3.2 免疫標記的冰凍置換
6.3.3
冰凍置換的各種使用方法
第7章
低溫包埋和免疫標記
7.1 漸進低溫脫水和丙烯樹脂包埋
7.1.1 溫度調整的方法和脫水溶劑
7.1.2 丙烯樹脂的特點和Lowicryl的配方
7.1.3 漸進低溫脫水方法
7.1.4
低溫滲透
7.1.5 低溫包埋
7.1.6 樹脂聚合
7.1.7
Lowicryl樹脂包埋塊的切片
7.2
LR White和LR Gold樹脂包埋
7.2.1
LR White樹脂的準備和包埋
7.2.2 LR Gold樹脂的包埋
7.3 免疫標記
7.3.1 免疫標記的準備和應注意的問題
7.3.2 丙烯酸樹脂切片的免疫標記步驟
7.3.3
後包埋免疫標記法
7.4 免疫標記信號增強法
7.4.1 納米金-銀染信號增強法
7.4.2
膠體金/抗生物素法
7.4.3 生物素-抗生物素金技術
7.4.4 生物素化酪胺和納米金銀染法
7.5 免疫標記中可能遇到的問題和處理方法
7.6 套用實例
7.6.1 動物單層細胞的後包埋免疫標記
7.6.2
植物細胞的低溫包埋和免疫標記
7.6.3 大鼠胰腺和肝組織的免疫電鏡標記??生物素一酪胺增強法
第8章
前包埋免疫電鏡技術
8.1 細胞和組織標記前的處理
8.2
抗體標記
8.3 前包埋免疫標記套用實例
8.3.1 過氧化物酶標記單層培養細胞抗原
8.3.2 納米金前包埋免疫電鏡
8.3.3
前包埋納米金一銀染和酪胺擴增法
8.4
前包埋免疫雙標記
第9章
螢光顯微鏡和免疫電鏡的對應定位技術
9.1 概述
9.2 突變細胞螢光活體和超微結構對應定位技術
9.2.1 活體突變細胞定位
9.2.2 電鏡樣品的處理和細胞定位
9.3 螢光納米金在螢光和免疫金標記的對應定位
9.3.1 螢光納米金探針的結構和特性
9.3.2 螢光納米金標記方法
9.4 冰凍超薄切片的對應免疫螢光光鏡和電鏡
9.5 量子點的光電鏡對應定位
9.5.1 量子點作為免疫細胞學標記物的主要特點
9.5.2 量子點標記套用實例
9.6 螢光蛋白的對應光電鏡定位
9.6.1 細胞螢光蛋白表達的光電鏡對應標記方法
9.6.2 綠螢光蛋白光氧化的對應螢光和電鏡方法
第10章
冰凍斷裂復型的免疫電鏡
10.1 概述
10.2
冰凍斷裂和刻蝕
10.2.1
樣品的準備
10.2.2
冰凍保護??甘油滲透方法
10.2.3 冷凍處理
10.2.4
冰凍斷裂
10.2.5
冰凍刻蝕
10.2.6 復型
10.2.7 復型膜的收集和清理
10.3 復型膜面的免疫標記
10.3.1 常規的標記步驟
10.3.2 冰凍、斷裂和復型前標記
10.3.3
冰凍斷裂後標記
10.3.4 斷裂和復型後的標記
10.3.5 復型一標記一切片和復型一標記一整體裝放
10.4 套用實例
10.4.1 用SDS消化冰凍斷裂復型和細胞化學標記膜間蛋白??免疫金標記胞間連線複合物
10.4.2 用SDS消化冰凍斷裂復型標記螺旋菌壁黏附素的新方法
第11章
負染色和免疫金標記技術
11.1 概述
11.2 負染色技術
11.2.1 負染色的材料和準備
11.2.2 負染色方法
11.3 負染色免疫電鏡方法
11.3.1 負染色免疫電鏡常規步驟
11.3.2 負染色免疫電鏡套用實例
11.4
冰凍負染色方法
11.4.1
材料準備
11.4.2 非染色冰凍樣品的製作步驟
11.4.3 薄膜玻璃化負染色樣品的製作
11.5 負染色需要注意的問題
附錄Ⅰ
附錄Ⅱ 部分冰凍固定、免疫標記和抗體製作技術網址
參考文獻
