巢式 PCR(nested PCR)技術
先用一對靶序列的外引物擴增以提高模板量 ,然後再用一對內引物擴增以得到特異的 PCR帶 ,此為巢式 PCR。若用一條外引物作內引物則稱之為半巢式 PCR。為減少巢式 PCR的操作步驟可將外引物設計得比內引物長些 ,且用量較少 ,同時在
第一次 PCR時採用較高的退火溫度而第二次採用較低的退火溫度 ,這樣在第一次 PCR時 ,由於較高退火溫度下內引物不能與模板結合 ,故只有外引物擴增產物 ,經過若干次循環 ,待外引物基本消耗盡 ,無需取出第一次PCR產物 ,只需降低退火即可直接進行 PCR擴增。這不僅減少操作步驟 ,同時也降低了交叉污染的機會。這種 PCR稱中途進退式。
