western印跡法

Western印跡法是將獲得的蛋白質樣品通過SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳，對不同分子量的蛋白質進行分離，然後通過轉移電泳將凝膠上分離到的蛋白質轉印到固相支持物上。

基本介紹

• 中文名：western印跡法
• 外文名：Western blotting
• 解釋：Southern印跡法後的類似方法
• 原理：將獲得的蛋白質分離

簡介

蛋白質經單向電泳後分離後被轉移到硝酸纖維濾膜上，然後用放射性或酶標記的特異抗體來檢測相應抗原的存在。

蛋白質印跡技術是1975年Southern建立了Southern印跡法後，人們用類似的方法對蛋白質進行印跡分析，稱為Western印跡法。

檢測原理

固相支持物包括NC（硝酸纖維素）膜、尼龍膜及PVDF（聚偏氟乙烯）膜等。通常使用的PVDF膜的規格是0.45 μm，如果靶蛋白的分子量小於10KD，則選用0.22μm的PVDF膜。轉膜的的方式有濕轉和半乾轉。用抗靶蛋白的非標記抗體（一抗）與膜進行雜交，使抗體與靶蛋白特異性結合後，再與經辣根過氧化物標記的二抗結合，最後用ECL試劑反應，經X線片曝光、顯影等一系列反應，達到檢測靶蛋白的目的。

原理