SABC(Strept Avidin-Biotin Complex)法是一種顯示組織和細胞中抗原分布的簡便而敏感的免疫組化染色方法，是眾多免疫組織化學方法的一種。
基本介紹
- 中文名：SABC法
- 外文名：Strept Avidin-Biotin Complex
- 縮寫：SABC
- streptomyces：親和素從鏈黴菌
簡介,實驗操作過程,
簡介
SABC法：一抗+ 生物素標記二抗+ 滴加試劑SABC（鏈霉卵白素+ 辣根酶標記生物素）+ 辣根酶底物顯色。目前常用的親和素從鏈黴菌(streptomyces)培養物中提取，因此稱為鏈霉親和素—生物素—過氧化物酶複合物技術(streptavidin biotin-peroxidase complex method，SABC法)。
生物素(biotin)為含硫的雜環單羧酸，分子量小，通過其羧基與蛋白質的氨基結合，從而可標記抗體和酶。親和素(avidin)又稱抗生物素蛋白，是一種糖蛋白，在雞蛋白中被發現，分子量為68 000。生物素與親和素有很高的親和力，1個親和素分子上有4個生物素結合位點。在ABC法中，不對特異性第一抗體進行標記，而用生物素標記第二抗體，染色前按一定比例將親和素與生物素標記的過氧化物酶混合，製成ABC合物，並使親和素分子上至少空出1個生物素結合位點。染色時，標本中的抗原先與第一抗體結合，後者再與生物素標記的第二抗體結合，然後加入ABC複合物，結合到第二抗體的生物素上，最終形成的複合物網路了大量的酶分子。因此，敏感性更高。
實驗操作過程
1）脫蠟、水化。
2）PBS洗兩次各5分鐘。
3）用蒸餾水或PBS配置新鮮的3%H2O2，室溫封閉5～10分鐘，蒸餾水洗3次。
4）抗原修復。
5）PBS洗5分鐘。
6）滴加正常山羊血清封閉液，室溫20分鐘。甩去多餘液體。
7）滴加Ⅰ抗，室溫1小時或者4℃過夜或者37℃1小時（4℃過夜後在37℃復溫45分鐘）。
8）PBS洗三次每次2分鐘。
9）滴加生物素化二抗，20℃～37℃20分鐘。
10）PBS洗3次每次2分鐘。
11）滴加試劑SABC，20℃～37℃20分鐘。
12）PBS洗4次每次5分鐘。
13）DAB顯色：DAB顯色試劑盒或者自配顯色劑顯色（鏡下掌握顯色程度）。
14）蒸餾水洗。蘇木素復染2分鐘、鹽酸酒精分化。
15）脫水、透明、封片、鏡檢。
