預裝柱

預裝柱用於純化蛋白質,高純度的蛋白洗脫呈現窄峰洗脫條件溫和,保護目標蛋白的活性,耐NaOH的清洗,可方便的配合注射器,蠕動泵或連線液相色譜系統使用MBPTrap HP 為純化帶有麥芽糖結合蛋白標記(MBP)的重組蛋白帶來了便利。

基本介紹

  • 中文名:預裝柱
  • 外文名:MBPTrap HP 
  • 作用:保護了目標蛋白的活性
  • 內含物:Dextrin Sepharose HP 凝膠
簡介,MKF疏水,選擇性,

簡介

MBPTrap HP 柱子裝有Dextrin Sepharose HP 凝膠。它牢固且又穩定的瓊脂糖填料基架能使目標蛋白洗脫呈一狹窄的峰,從而減少了進一步濃縮的需求。
純化在物理條件下進行,溫和的洗脫方式保護了目標蛋白的活性,其溫和的條件甚至可以純化完整的蛋白複合物。
由於結合的高度專一性,只需一步洗脫即可達到高純度。
StrepTrap HP填料方便地提供了通過親和層析的方法純化Strep ( II )標記的重組蛋白。這類預裝柱內裝有StrepTactinTM SepharoseTM HP凝膠。streptavidin經過特殊耦合改造成StrepTactin ,確保了其最優的結合特性。它牢固且又穩定的瓊脂糖填料基架可帶來高解析度,尖銳集中的洗脫峰和高的重現性。純化在物理條件下進行,且溫和的洗脫條件確保了目標蛋白的活性。由於結合的高度專一性,只需一步洗脫即可達到高純度。

MKF疏水

MKF疏水性相互作用色譜柱填料的表面具有弱疏水性特徵。RPC方法是基於強疏水性作用,而疏水性相互作用色譜(HIC: hydrophobic interaction chromatography)方法則依賴於溶質與填料表面之間弱的疏水性相互作用。在高離子強度的鹽水溶液淋洗條件下,蛋白質分子中的疏水性部分與填料表面產生疏水性相互作用而被吸附,當淋洗液的離子強度逐漸降低時,蛋白樣品則按其疏水性特徵被依次洗脫,疏水性越強,洗脫的時間越長,用此原理來實現分離。其特點是,既可以避免使用含有大量有機溶劑的淋洗體系,又能有效地保持被分離物質的生物活性。
一般來說,生物大分子大都含有或強或弱的疏水區域,在不同環境中,生物樣品與各種疏水介質所產生的疏水性相互作用大小亦各不相同,正是由於這種原因,才使HIC分離方法得以建立和實施。MKF的HIC填料,絕大多數是多孔結構的,它們的負載量都比較高,每毫升樹脂可負載數十毫克的蛋白樣品。以特定物理結構PS-DVB樹脂為基質的產品,更適於在很高流速下,快速高效的精細分離純化蛋白質等生物樣品。
MKF疏水作用介質有四種類型,它們有不同的化學表面和不同的疏水性,其疏水性強弱程度,依次為苯基>C8>C4>異丙基>醚鏈

選擇性

蛋白質在高鹽濃度時吸附在樹脂上的吸附強度與樹脂疏水性和鹽濃度直接相關。選擇合適的疏水作用介質,無機鹽的用量可以降低到最低,活性回收可以最大。高疏水性介質常用來分離低疏水性的蛋白。弱疏水性介質常用來純化疏水性很強的蛋白質比如單克隆抗體和膜蛋白,如果這兩種蛋白和疏水介質結合的非常牢固會導致低的回收率。

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