雜交瘤單克隆抗體技術是套用適當的抗原免疫小鼠，然後取免疫鼠(PEG) 與鼠的脾細胞(抗體形成細胞) 或取體外免疫的脾細胞，藉助聚乙二醇骨髓瘤細胞系融合形成分泌單克隆抗體的雜交瘤，若接種於小鼠腹腔便產生腹腔雜交瘤，這種瘤細胞就能源源不斷地分泌出特異性的單克隆抗體。
雜交瘤是由一種短命的，但能分泌某種特異性抗體的B淋巴細胞和長命的骨髓瘤細胞融合而成的。這種雜交的細胞是長命的細胞系，它能分泌一種純一分子的特異性抗體，稱為單克隆抗體(monoclonal antibody)。
親代骨髓瘤細胞系，在體外細胞培養中可以連續傳代，具有無限的生命力，與脾細胞雜交後，部分細胞能融合形成雜交瘤細胞，但還有許多骨髓瘤細胞未與脾細胞融合。未融合的骨髓瘤細胞仍然在培養液中生長繁殖，干擾雜交瘤細胞的生長，因此要從這些細胞中挑選出已雜交的細胞，讓其生長繁殖，而使未融合的骨髓瘤細胞和免疫牌細胞全部死亡，套用HAT培養液選擇培養可達到這個目的，其基本原理是利用 骨髓瘤細胞缺 少次 黃 噪 呤 磷 酸核糖轉化酶(hypoxanthineguaninephosphorsy-transferase,HGPRT) 的特點，在培養液中加人次黃嘌呤(hypoxanthine)、氨基碟呤(aminopterin) 和胸腺嘧啶(thymidine) 製成選擇培養液(HAT 培養液)。
通常細胞的核酸生物合成有主要途徑和補償途徑，當氨基碟呤存在時，能夠阻斷核酸(DNA) 合成的主要途徑，因此要通過補償途徑合成DNA，這時就需要次黃嘌呤磷酸核糖轉化酶(HGPRT) 利用次黃瞟呤合成DNA 或胸腺略啶核苷激酶(thymidine kinase,TK) 利用胸腺嘧啶核苷合成DNA，在這種情況下，因骨髓瘤細胞缺乏次黃嘌呤磷酸核糖轉化酶和胸腺嘧啶核苷激酶，在HAT培養液中迅速死亡，免疫脾細胞雖有HGPRT,但因它是一種短命的細胞，在培養液中也只能生存數天而逐漸死亡，只有骨髓瘤細胞與免疫脾細胞融合的雜交細胞獲得了骨髓瘤細胞所具有的長命而且繁殖力極強的特徵，同時又從免疫脾細胞得到功能性HGPRT和TK 的基因產物，因此，這種雜交細胞能夠克服氨基碟呤的阻斷作用，通過次黃嘌呤的補償途徑合成DNA,而在HAT 選擇培養液中生長繁殖。細胞核酸生物合成的主要途徑與補償途徑。
