雙元表達載體系統，是一種分子生物學用語，用於缺失了T－DNA 區域。
基本介紹
- 中文名：雙元表達載體系統
- 部位：卸甲Ti質粒
- 由於：缺失了T－DNA 區域
- 結果：喪失了致瘤作用
兩部分,原理,
兩部分
雙元表達載體系統主要包括兩個部分：
一部分為卸甲Ti質粒，這類Ti質粒由於缺失了T－DNA 區域，完全喪失了致瘤作用，主要是提供Vir基因編碼表達Vir蛋白的功能，VIR基因編碼的virD2蛋白相當於反式作用元件，能夠識別農桿菌轉運DNA（T-DNA）兩端24bp序列,進而將T-DNA以單鏈的形式切割下來，同時，VIR基因編碼的virE2能夠與單鏈T-DNA結合，形成T-複合物，在核定位序列的作用下，經過宿主細胞T4SS轉運體系進入宿主細胞質。之後便是宿主細胞的轉運過程，激活處於反式位置上的T－DNA的轉移。
另一部分則是含有T-DNA的微型質粒，它帶有目的基因和大腸桿菌及農桿菌複製的起始位點，實際上是一種分子質量較小的大腸桿菌和農桿菌的穿梭載體。
原理
1.一般植物表達載體是成套使用的，一套中有兩個，一個是帶有可以供插入外源表達基因的MCS和篩選標籤的融合蛋白（通常是GFP或Gus）的普通載體。另一個載體就是雙元載體（binary-vector）了。通常我們是先將外源基因插入帶有篩選標記的載體，然後將此載體上的35S promoter-expression gene-gfp這段全部切下，然後構建亞克隆，其過程就是將上述的片斷插入雙元載體的LB和RB之間，其插入方向是可以任意的。然後將帶有35S promoter-expression gene-gfp的雙元載體轉化農桿菌，再通過農桿菌轉染植物，最後可以通過農桿菌特有的ti-DNA轉染機制，將雙元載體的LB和RB之間的片段融合進宿主的基因組上。我以前用的是pCAMBIA3101+pUC-35S-GFP以及pZPZ211和pAA等 2.雙元表達載體系統主要包括兩個部分 3.一部分為輔助Ti質粒，這類Ti質粒由於缺失了T－DNA 區域，完全喪失了致瘤作用，主要是提供vir基因功能，vir基因能識別並切割LB、RB區域中的相應位點，激活處於反式位置上的T－DNA的轉移。 4.另一部份是微型Ti質粒(Mini-Ti plasmid)，它在T－DNA左右邊界序列之間提供植株選擇標記如NPTII基因以及Lac Z基因等。 5.雙元載體系統的構建的原理是Ti質粒上的vir基因可以反式激活T－DNA 的轉移。與共整合載體所不同的是，它不依賴兩個質粒之間的同源序列，不需要共整合過程就能在農桿菌內獨立複製。 6.外源DNA克隆到微型Ti質粒 T－DNA左右邊界序列之間
