基本介紹
- 中文名：重組子
- 外文名：recon
- 定義：含有重組DNA分子的轉化細胞
- 篩選方法：抗生素篩選法、互補法
- 其他外文名：recombinant
- 轉化：將異源DNA分子導入另一細胞品系
單位介紹,轉化,篩選,
單位介紹
重組子（recon）：兩個位於不同載體或染色體上的突變位點之間可發生交換產生野生型的最小單位，即不能由重組分開的基本單位。
重組子（recombinant), 含有重組DNA分子的轉化細胞。
轉化
轉化（transformation）是將異源DNA分子導入另一細胞品系，使受體細胞獲得新的遺傳性狀的一種手段。其原理是細菌處於0℃， CaCl2低滲溶液中，菌細胞膨脹成球形。
轉化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羥基-鈣磷酸複合物黏附於細胞表面，經42℃短時間熱激處理，促進細胞吸收DNA複合物。進入細胞的DNA分子通過複製、表達，實現遺傳信息的轉移，使受體細胞出現新的遺傳性狀。
將經轉化後的細胞在選擇性培養基中培養，即可篩選出轉化體(transformant)，即帶有異源DNA分子的受體細胞。
篩選
根據載體的遺傳特徵篩選重組子，如α-互補、抗生素基因等。至今使用的許多載體都帶有一個大腸桿菌的DNA的短區段，其中有β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的調控序列和前146個胺基酸的編碼信息。在這個編碼區中插入了一個多克隆位點（MCS），它並不破壞讀框，但可使少數幾個胺基酸插入到β- 半乳糖苷酶的氨基端而不影響功能，這種載體適用於可編碼β-半乳糖苷酶C端部分序列的宿主細胞。因此，宿主和質粒編碼的片段雖都沒有酶活性，但它們同時存在時，可形成具有酶學活性的蛋白質。這樣，LacZ基因在缺少近操縱基因區段的宿主細胞與帶有完整近操縱基因區段的質粒之間實現了互補，稱為α-互補。由 α-互補而產生的LacZ+細菌在誘導劑IPTG的作用下，在生色底物X-Gal存在時產生藍色菌落，因而易於識別。然而，當外源DNA插入到質粒的多克隆位點後，幾乎不可避免地導致無α-互補能力的氨基端片段，使得帶有重組質粒的細菌形成白色菌落。這種重組子的篩選，又稱為藍白斑篩選。如用藍白斑篩選則經連線產物轉化的鈣化菌平板37℃溫箱倒置培養12-16hr後，有重組質粒的細菌形成白色菌落。
這和受體菌：質粒DNA的選擇相關， 原則上要注意：
1、 受體菌必須是限制與修飾系統缺陷的菌株；
2、 根據質粒基因型和受體菌基因型互補原則而定；
重組子的篩選方法常用的有兩種方法：
1、 抗生素篩選法：菌株為某種抗生缺陷型， 而質粒上帶有該抗性基因（如氨苄青黴素， 卡拉黴素等）這樣只有轉化子才能在含該抗生素的培養基上長出。本實驗利用抗生篩選轉化子。
2、互補法：至今使用的許多載體（如PUC系列）有含有一個大腸桿菌DNA的短區段，其中含有β－半乳糖苷酸基因（lacZ）的調控序列和頭146個胺基酸偏碼區。這個偏碼區中插入一個多克隆位點。受體菌則含編碼β－半乳糖苷酶C端aa的序列。當外源基因插入時，二者溶為一體後，有β－半乳糖苷酶表達，在生色底物5－溴－4－氯－3－吲哚－β－D－半乳糖苷（x-gal）培養基中形成蘭色菌落。而當有外源基因插入到多克隆原點，從而造成插入失活，而使 lacZ基因不表達而形成白色菌斑。 通過顏色不同而區分重組子和非重組子。位於不同載體或染色體上的
這和受體菌：質粒DNA的選擇相關， 原則上要注意：
1、 受體菌必須是限制與修飾系統缺陷的菌株；
2、 根據質粒基因型和受體菌基因型互補原則而定；
重組子的篩選方法常用的有兩種方法：
1、 抗生素篩選法：菌株為某種抗生缺陷型， 而質粒上帶有該抗性基因（如氨苄青黴素， 卡拉黴素等）這樣只有轉化子才能在含該抗生素的培養基上長出。本實驗利用抗生篩選轉化子。
2、互補法：至今使用的許多載體（如PUC系列）有含有一個大腸桿菌DNA的短區段，其中含有β－半乳糖苷酸基因（lacZ）的調控序列和頭146個胺基酸偏碼區。這個偏碼區中插入一個多克隆位點。受體菌則含編碼β－半乳糖苷酶C端aa的序列。當外源基因插入時，二者溶為一體後，有β－半乳糖苷酶表達，在生色底物5－溴－4－氯－3－吲哚－β－D－半乳糖苷（x-gal）培養基中形成蘭色菌落。而當有外源基因插入到多克隆原點，從而造成插入失活，而使 lacZ基因不表達而形成白色菌斑。 通過顏色不同而區分重組子和非重組子。位於不同載體或染色體上的
