貼壁培養

貼壁培養（monolayer culture）是指細胞貼附在一定的固相表面進行的培養。

基本介紹

• 中文名：貼壁培養
• 外文名：monolayer culture
• 生長特性：貼壁依賴型細胞在培養時要貼
• 優點： 容易更換培養液；

生長特性

貼壁依賴型細胞在培養時要貼附於培養（瓶）器皿壁上，細胞一經貼壁就迅速鋪展，然後開始有絲分裂，並很快進入對數生長期。一般數天后就鋪滿培養表面，並形成緻密的細胞單層。

貼壁培養的優點

●容易更換培養液；細胞緊密黏附於固相表面，可直接傾去舊培養液，清洗後直接加入新培養液。

●容易採用灌注培養，從而達到提高細胞密度的目的；因細胞固定表面，不需過濾系統。

●當細胞貼壁於生長基質時，很多細胞將更有效的表達一種產品。

●同一設備可採用不同的培養液/細胞的比例。

●適用於所有類型細胞。

3. 貼壁培養的缺點：與懸浮培養法相比

●擴大培養比較困難，投資大；

●占地面積大；

●不能有效監測細胞的生長；

細胞貼壁的表面

要求具有淨陽電荷和高度表面活性。對微載體而言還要求具一定電荷密度；若為有機物表面，必須具有親水性，並帶陽電荷。

貼壁培養系統

主要有轉瓶、中空纖維（後面專題介紹）、玻璃珠、微載體系統（後面介紹）等。

●轉瓶培養系統：培養貼壁依賴型細胞最初採用轉瓶系統培養。轉瓶培養一般用於小量培養到大規模培養的過渡階段，或作為生物反應器接種細胞準備的一條途徑。 細胞接種在旋轉的圓筒形培養器-轉瓶中，培養過程中轉瓶不斷旋轉，使細胞交替接觸培養液和空氣，從而提供較好的傳質和傳熱條件。

轉瓶培養具有結構簡單，投資少，技術成熟，重複性好，放大只需簡單的增加轉瓶數量等優點。

但也有其缺點：勞動強度大，占地空間大，單位體積提供細胞生長的表面積小，細胞生長密度低，培養時監測和控制環境條件受到限制等。

現在使用的轉瓶培養系統包括二氧化碳培養箱和轉瓶機兩類。

●反應器貼壁培養 此種培養方式中，細胞貼附於固定的表面生長，不因為攪拌而跟隨培養液一起流動，因此比較容易更換培養液，不需要特殊的分離細胞和培養液 的設備，可以採用灌流培養獲得高細胞密度，能有效地獲得一種產品；但擴大規模較難，不能直接監控細胞的生長情況，故多用於製備用量較小、價值高的生物藥 品。

CelliGen、 CelliGen PlusTM和Bioflo3000反應器是常用的貼壁培養式生物反應器，用於細胞貼壁培養時可用籃式攪拌系統和圓盤狀載體。此載體是 直徑6毫米無紡聚酯纖維圓片，具很高表面積與體積比（1200cm2/g），利於獲得高細胞密度。籃式攪拌系統和載體培養是目前貼壁細胞培養使用最多方 式，用於雜交瘤細胞、Hela細胞、293細胞、CHO細胞及其它細胞培養。此種方式培養細胞，細胞接種後貼壁快。