蛋白質印跡雜交

蛋白質印跡雜交,是指將蛋白質電泳、印跡、免疫測定融為一體的特異性蛋白的檢測方法。蛋白質印跡雜交技:術是一種蛋白質的固定和分析技術,是將已用聚丙烯醯胺凝膠或其他凝膠或電泳分離的蛋白質I轉移到硝酸纖維濾膜上,固定在濾膜上的蛋白質:成分仍保留抗原活性及與其他大分子特異性結;合的能力,所以能與特異性抗體或核酸結合,其|程式與DNA印跡相似,故稱為蛋白質印跡。其;流程是:生物中含有一定量的目的蛋白。

先從生物細胞中提取總蛋白或目的蛋白,將蛋白質樣品i溶解於含有去污劑和還原劑的溶液中,經SDS~:PAGE電泳將蛋白質按分子質量大小分離,再把分離的各蛋白質條帶原位轉移到固相膜(硝酸纖I維素膜或尼龍膜)上,接著將膜浸泡在高濃度的i蛋白質溶液中溫育,以封閉其非特異性位點。然後加入特異抗體(一抗)膜的目的蛋白(抗原):與一抗結合後,再加入能與一抗專一性結合的帶i標記的二抗(通常一抗用來源於兔的抗體時,二抗常用羊抗兔免疫球蛋白抗體),最後通過二抗上帶標記化合物(一般為辣根過氧化物酶或鹼性磷酸酶)的特異性反應進行檢測。

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