蛋白定量

蛋白定量即蛋白質定量，蛋白質定量根據其目的可分為全蛋白質的“總定量法”和特定蛋白質的“個別定量法”。蛋白定量是生物學實驗不可缺少的一部分。為驗證細胞裂解是否成功，或為了將多個樣品進行平行實驗比較或標準化保存，需對細胞裂解液進行蛋白定量；為了判定蛋白的產量，需對純化好的蛋白進行定量；為了將純化好的蛋白用生物素或者報告酶進行標記，同樣需首先對蛋白樣品進行定量，以保證標記反應在適當的化學濃度下進行。

基本介紹

• 中文名：蛋白定量
• 地位：生物學實驗不可缺少的一部分
• 實質：分析是生物化學和其他生命學科
• 詳細內容：見正文

蛋白定量介紹

蛋白質的定量分析是生物化學和其他生命學科員常涉及的分析內容。在生化實驗中，對樣品中的蛋白質進行準確可靠的定量分析，是經常進行的一項非常重要的工作。蛋白質是一種十分重要的生物大分子，它的種類很多，結構不均一，分子量又相差很大，功能各異，這樣就給建立一個理想而又通用的蛋白質定量分析的方法帶來了許多具體的因難。

現測定蛋白質含量方法有很多。

① 根據物理性質：紫外分光光度法

② 根據化學性質：凱氏定氮法、雙縮脲法、Folin-酚試劑法（Lowry法）、BCA法、膠體金法。

③ 根據染色性質：考馬斯亮藍染色法、銀染法。

④ 根據其他性質：螢光法。

蛋白定量分析也就涉及到生產科研的多個領域及行業，也是生物學科、食品檢驗及摻假摻偽、臨床檢驗、診斷疾病和質量檢驗中最常見的方法。
蛋白定量的測試方法有很多種，其中較為常見的有五種，分別是Bradford法、Bradford斑點試驗、Coomassie 斑點試驗、紫外分光度檢測法及BCA法這五種。當然，每種方法適用的情況都有所不同。

Bradford法

該方法用於大多數蛋白質定量是相當精確的，特別是用於小分子多肽定量。如核糖核酸酶或溶菌酶等。但是，去污劑的濃度超過0.2%則影響定量結果。如TritonX-100，SDS，NP-40等。

Bradford斑點試驗

該方法特別適用於檢測洗脫組分，以定位蛋白洗脫液。例如檢測洗脫液的吸附力的強弱。

Coomassie 斑點試驗

該方法特別適用於檢測洗脫組分以定位蛋白洗脫液。例如檢測洗脫液的吸附力的強弱。

紫外分光度檢測法

蛋白質紫外光吸光率是所有的蛋白質定量方法中最快的方法。通常在280nm光波長下讀數。其在280nm光波長下的最大吸光率主要取決於酪氨酸和色氨酸的存在。在205nm光波長的吸收也常用到。其在205nm光波長下的最大吸光率主要處決於肽鏈，儘管胺基酸也有影響。另外，一個主要的優點是在測定蛋白質濃度時，樣本不會遭到損害。

BCA法

BCA法特點： 1、靈敏度高，檢測濃度下限達到25μg/ml，最小檢測蛋白量達到0.5μg，待測樣品體積為1-20μl 。 2、測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的去污劑等化學物質的影響，可以兼容樣品中高達5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20，60，80。 3、 在20-2000μg/ml濃度範圍內有良好的線性關係。 4、 檢測不同蛋白質分子的變異係數遠小於考馬斯亮藍法蛋白定量。 5.、受螯合劑和略高濃度的還原劑的影響：EDTA小於10mM。DTT小於1mM巰基乙醇低於1mm。

蛋白樣本定量

蛋白測定試劑盒和比色皿：可允許通過修改 Bradford 和 Lowry 方法進行蛋白測量。

分光光度法：bio-rad SmartSpec Plus 是一種紫外/可見分光光度計，適用於多種定量套用。

螢光測定法：台式 VersaFluor 螢光計可容納支持大範圍激發和發射波長的過濾器。