藍白篩選法是指外來序列插入後則破壞了lacZ '編碼的半乳糖苷酶活性使生長的菌落由藍色變為白色的一種篩選載體的方法。
基本介紹
- 中文名：藍白篩選法
- 工具：質粒
- 對象：細菌
- 分類：生物
質粒pUC19的複製起點處序列經過改造，能高頻率起動質粒複製，使一個細菌pUC19的拷貝數可達500-700個；質粒攜帶一個抗氨芐青黴素基因，編碼能水解β-內醯胺環，從而被壞氨芐青黴素的酶，當用pUC19轉化細菌後放入含氨芐青黴素的培養基中，凡不含pUC19者都不能生長，結果長出的細菌就是都含有pUC19的；pUC19還攜帶細菌lac操縱元中的lacI和LacZ基因編碼，β-半乳糖苷酶N端狀146個胺基酸的段落，當培養基中含有誘導物IPTG(isopropyl-thiogalactoside異丙基-硫代半乳糖苷)和Xgal(5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyranoside)時，lacZ'基因被誘導表達產生的β-半乳糖苷酶N端肽與宿主菌表達的C端肽互補而具有β-半乳糖苷酶活性（質粒和宿主編碼的肽段各自都沒有酶活性，兩都融為一體而具酶活性，稱為α-互補，α-complementation），半乳糖苷酶水解Xgal而使菌落呈現藍色；在lacZ'中間又插入了一段人工設計合成的DNA序列，其中密集多個常用的限制性核酸內切酶的位點，使外來的基因和序列能很方便地被插入此位置，當外來序列插入後則破壞了lacZ'編碼的半乳糖苷酶活性，生長的菌落就呈白色，這種顏色標誌的變化就很容易區分和挑選含有和不含有插入序列或基因的轉化菌落，稱為藍白篩選法。
