肽質量指紋譜分析

肽質量指紋譜分析

肽質量指紋譜分析也稱肽指紋圖譜,是目前蛋白質組研究中鑑定蛋白較為常用的方法。

基本介紹

  • 中文名:肽質量指紋譜分析
  • 外文名:Peptide Mass Fingerprinting,PMF
  • 又稱:肽指紋圖譜
簡介,原理,常用方法,

簡介

肽質量指紋譜分析(Peptide Mass Fingerprinting,PMF),也稱肽指紋圖譜,是目前蛋白質組研究中鑑定蛋白較為常用的方法。不同的蛋白質經專一解後產生特定的肽段序列,採用生物質譜對肽混合物進行質量分析,結合資料庫檢索對庫中的已知蛋白質進行鑑定。

原理

由於每種蛋白質的胺基酸序列(一級結構)都不同,蛋白質被酶水解後,產生的肽片段序列也各不相同,其肽混合物質量數亦具特徵性,所以稱為指紋譜,可用於蛋白質的鑑定,即用實驗測得的蛋白質解肽段質量數在蛋白質資料庫中檢索,尋找具有相似肽譜的蛋白質。

常用方法

測定肽混合物質量數最有效的質譜儀是MALDI-TOF-MS(基質輔助雷射解吸電離飛行時間質譜,英文名Matrix-Assisted Laser Desorption/ Ionization Time of Flight Mass Spectrometry),靈敏度高,譜峰簡單,每個譜峰代表一種肽段。MALDI-TOF-MS分析肽混合物時,能耐受適量的緩衝劑、鹽,而且各個肽片幾乎都只產生單電荷離子,因此MALDI-TOF成為進行分析PMF的首選方法。
但是蛋白質可能存在翻譯後修飾,電泳過程中某些胺基酸會引入質量修飾,這樣在蛋白質的肽譜中就有一些質量數與理論值不符,但肽譜鑑定的好處就在於不需將全部質量數都與理論值相符。做肽譜,我們收到的樣品可以是考染的凝膠,也可以是銀染的凝膠(但顏色不要太淡了,即量不能太少),或是溶液(但要保證二級結構不能太複雜)。

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